豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用實時熒光RT-PCR檢測試劑盒

本公司專業(yè)研究及經(jīng)營農獸藥殘留檢測試劑、生化試劑、酶及農藥獸藥殘留檢測專用酶、標準品、固相萃取柱、色譜柱、實驗室儀器設備等實驗耗材的新技術推廣，公司所代理的產(chǎn)品均為我國農牧業(yè)系統(tǒng)內科研單位及相關檢測機構認可并廣泛推廣使用的國內外知名品牌。產(chǎn)品質量穩(wěn)定，技術可靠。公司依托于多家農牧業(yè)系統(tǒng)的科研單位和相關檢測機構，并且建立了良好的技術合作關系。公司擁有一批從事食品化學分析、農藥獸藥殘留檢測工作的專業(yè)技術人員，可隨時為用戶提供最完善的檢測技術咨詢服務，并為初步涉及農產(chǎn)品、畜產(chǎn)品檢測單位提供實驗室整體方案設計及技術人員培訓等全程技術指導工作。 專業(yè)研究及經(jīng)營農獸藥殘留檢測試劑、生化試劑、酶及農藥獸藥殘留檢測專用酶、標準品、固相萃取柱、色譜柱、實驗室儀器設備等實驗耗材并廣泛推廣國內外知名品牌

豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用實時熒光RT-PCR檢測試劑盒
豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用實時熒光RT-PCR檢測試劑盒
豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用實時熒光RT-PCR檢測試劑盒
北京威瑞谷生物技術有限公司

：張先生

：

QQ ：1300824173

豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒

英文名稱：Porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）real-time RT-PCR Test Kit

【包裝規(guī)格】50 份/盒

【預期用途】

豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒，采用實時熒光反轉錄聚合酶鏈反應（real-timeRT-PCR ）技術檢測豬血清和組織中的PRRSV，適用于PRRSV 的檢測、診斷和流行病學調查。

【檢測原理】

利用吸附柱提取RNA 作為模板，在反轉錄酶的作用下，以引物為起點合成與RNA 模板互補的cDNA 鏈；然后

在DNA 聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫延伸的多次循環(huán)，使特異DNA 片段的拷貝數(shù)放大數(shù)百萬倍。經(jīng)熒光素

標記的探針與擴增的DNA 雜交，利用DNA 聚合酶的5′→3′外切酶活性，使熒光探針的報告基團與淬滅基團分離，

發(fā)出特異性熒光信號；利用熒光PCR 儀檢測特異性熒光信號，并根據(jù)樣品Ct 值的大小及擴增曲線的形成情況判定結

果。

【主要組成成份】

大盒

（室溫保存）

序號名稱規(guī)格（50T） 序號名稱規(guī)格（50T）

1 裂解液35mL 5 洗脫液1mL×2

2 BME 400μL 6 吸附柱和收集管52 套

3 異丙醇35mL 7 8 聯(lián)PCR 反應管7 條

4 洗滌液35mL×2

小盒

（-20℃保存）

8 陰性對照1mL 10 RT-PCR 反應液A 558μL×2

9 陽性對照1mL 11 RT-PCR 反應液B 80μL

【儲存條件及有效期】

儲存條件詳見【主要組成成份】，本試劑盒有效期為6 個月。

【適用儀器及材料】

1. 設備：分析天平、離心機（12000 轉/分鐘）、熒光PCR 儀、-20℃冰箱。

2. 器材：眼科剪、眼科鑷、組織研磨器（研缽或勻漿器）、一次性注射器、可調移液器（2.5μL、20μL、200 μL、

1000 μL）、計時器。

3. 耗材及試劑：生理鹽水、無RNA 酶的1.5 mL 離心管和吸頭（10μL、200 μL、1000 μL）、滅菌蒸餾水。

【樣品要求】

1. 病死或撲殺的豬，取肺、扁桃體和腦等組織。

2. 待檢活豬，用注射器取血5 mL。

3. 立即檢測或短期內2～8 ℃保存，避免反復凍融。

【檢驗方法】

一、樣品制備

1. 組織樣品的處理：每份組織分別從三個不同的位置稱取樣品約1g，用手術剪剪碎混勻后取0.1g 于研磨器中磨碎，

再加1mL 生理鹽水繼續(xù)磨至無塊狀物；然后將樣品轉至1.5 mL 滅菌離心管中，8000 rpm 離心2 min，取200 μ

L 上清于1.5 mL 滅菌離心管中。

2. 全血樣品的處理：待血凝后取200 μL 血清于1.5 mL 滅菌離心管中。

3. 陽性對照的處理：混勻后，8000rpm 離心2min，取200 μL 上清于1.5 mL 滅菌離心管中。

4. 陰性對照的處理：取200 μL 于1.5 mL 滅菌離心管中。

二、病毒RNA 的提取

1. 往裂解液中加入BME 340μL，充分混勻。（加入了BME 的裂解液須置于4℃保存）

2. 取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入600μL 裂解液，上下顛倒混勻8～10 次，室溫靜置10min 。

3. 加入600μL 異丙醇，上下顛倒混勻5 次。

4. 吸取650μL 混合液轉入吸附柱，12,000 rpm 離心45s，棄去收集管中液體，套回收集管。

5. 重復步驟4。

6. 向吸附柱中加入600μL 洗滌液，12,000 rpm 離心45s，棄去收集管中液體，套回收集管。

7. 重復步驟6。

8. 空柱12,000 rpm 離心2 min。

9. 將吸附柱移入新的無RNA 酶的1.5 mL 離心管中，在吸附柱膜中央加入25μL 洗脫液，室溫靜置1min，12,000 rpm

離心45s，獲得總RNA。立即檢測或-20℃保存。

三、實時熒光RT-PCR

1. 反應體系配制：每份總體積25 μL，按下表配制，充分混勻，并作好標記。

試劑用量

RT-PCR 反應液A 21μL

RT-PCR 反應液B 1.5μL

模板RNA 2.5μL

2. 反應程序：在熒光PCR 儀上進行以下反應：42 ℃ 15 min，95 ℃ 3min；循環(huán)95 ℃ 5 s，58℃ 40 s，共40 次，

在每次循環(huán)第二步（58℃ 40s）收集FAM 熒光信號（報告基團“FAM”，淬滅基團“None”）。

【參考值】陽性對照Ct 值≤30.0 且出現(xiàn)典型擴增曲線，陰性對照無Ct 值或Ct 值=40 時，實驗成立。

【檢驗結果的解釋】

1 結果分析條件設定

閾值設定原則：閾值線設定于剛好超過陰性對照擴增曲線的zui高點。不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進行調整。

2 結果描述及判定

當被檢樣品出現(xiàn)典型的擴增曲線且Ct 值≤30.0 時為豬繁殖與呼吸綜合征病毒陽性，無Ct 值為豬繁殖與呼吸綜合征

病毒陰性；對于Ct 值＞30.0 的樣品，應重檢，Ct 值＞38.0 的樣品判為陰性，Ct 值≤38.0 的樣品判為陽性。

【注意事項】

1．各試劑須在規(guī)定的溫度儲存。

2．本試劑盒有效期為6 個月，不要使用超過有效期的試劑。

3. 嚴格遵守說明書操作，可以獲得的實驗結果，移液、定時等全部過程必須。

4．保存于-20℃的試劑使用前須完全融化，并充分混勻，8000rpm 離心15s，使液體全部沉于管底，放于冰盒中，吸

取液體時移液器吸頭盡量在液體表面層吸取，使用后立即放回-20℃。

5. 反復凍融試劑將降低檢測的靈敏度，建議3 次內用完。

6．注意防止試劑盒組份受污染，不同試劑盒之間的組份不要混用。

7．RNA 提取過程中，須戴口罩、勤換手套，盡量縮短操作時間，避免RNA 酶污染。

8. BME 含有對人體有害的物質，室溫下避光保存，且避免直接接觸。

本頁產(chǎn)品地址：http://www.mingjiewl.com/sell/show-7217790.html