植物核蛋白和細胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白和其它細胞質(zhì)蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。...

植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒-非酶法

 

產(chǎn)品編號：HR0137

產(chǎn)品組成：

保存條件：

蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒-非酶法產(chǎn)品簡介：

植物核蛋白和細胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白和其它細胞質(zhì)蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關產(chǎn)品HR0389）。

本試劑盒采用非酶法提取，提取過程簡單方便，速度快，可在1小時內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。酶法提取制備的蛋白，回收率稍有提高，蛋白純度高，保持天然活性，但是耗時較長。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒（相關產(chǎn)品HR8062）。請根據(jù)實際需要選擇試劑盒。

產(chǎn)品特點：

● 使用方便。

● 將蛋白提取的時間縮短至1小時。

● 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿機/Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器

● 100μm細胞篩 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

● 離心機轉速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉速（RPM）兩種表示方式，有些離心機設置有RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算：

g=r×1.118×10^-5×rpm² （r為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米) 例如: 轉速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒-非酶法使用方法：

1、提取液制備：

每500μL冷的蛋白提取液A中加入1μL蛋白酶抑制劑；每200μL蛋白提取液B中分別加入1μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2、取200-500mg新鮮植物葉片，用PBS或純水洗凈擦干后去除葉梗和粗脈，用手術剪刀盡可能剪碎。

3、加入500μL-1000μL提取液A后用勻漿機充分勻漿或勻漿器充分勻漿。

【注】：

● 勻漿盡可能充分。至無明顯可見固體。

● 培養(yǎng)細胞直接收集細胞后用勻漿器勻漿即可，勻漿后加提取液A混勻后直接進行以下步驟離心。

● 處理葉片等組織樣本如沒有勻漿機，也可先加少量提取液A后用勻漿器充分勻漿再加提取液A混勻。

4、將勻漿用100μm細胞篩過濾。

【注】：

● 沒有細胞篩時可以不過濾，將勻漿液靜置1分鐘，待大的沒有破碎的組織塊自然沉降，吸取上清。

● 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取，可以將1mL吸頭的口剪掉一點再吸。

5、將濾液在4℃，800×g力條件下離心5分鐘。

6、收集沉淀（I），將上清（I）移入另一干凈的離心管。

7、在沉淀（I）中加入100-200μL冷的提取液B，高速渦旋5秒，充分混勻。

8、置4℃振蕩20-40分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體稍微有晃動即可。

● 無低溫振蕩條件可不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

9、在4℃，12000×g 條件下離心10分鐘。

10、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到核蛋白。

11、在步驟6中的上清（I）中加入50μL胞質(zhì)提取液C，高速渦旋振蕩10秒，充分混勻。

12、置4℃振蕩5分鐘。

13、在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。

14、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到細胞質(zhì)蛋白。

15、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?

【注】：

● 建議用BCA 法進行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

常見問題分析：

● 蛋白濃度低？

植物核蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，盡可能增加樣本量。

處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當增加試劑A的勻漿次數(shù)，并適當延長試劑B的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA 法。不適合用Bradford法，因為試劑中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？

蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10 秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進行超聲處理。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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