禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒RT-P是高品質(zhì)的病毒PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒RT-P是我司眾多優(yōu)質(zhì)病毒PCR檢測(cè)試劑盒之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購(gòu)。...

特別提示：包括禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒(雙酶一管式)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒(雙酶一管式)
英文名稱：Reticuloendotheliosis Virus RT-PCR Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN11-180602
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本產(chǎn)品是專門(mén)用于REV的RT-PCR檢測(cè)的試劑盒，網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病是由網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒 （Reticuloendotheliosis Virus，REV）引起的一種腫瘤性傳染病,病雞表現(xiàn)為貧血、消瘦，生長(zhǎng)緩慢等。病理解剖特點(diǎn)是肝臟、腸道、心臟和其他器管有淋巴瘤，胸腺和法氏囊萎縮，腺胃炎。本病能侵害機(jī)體的免疫系統(tǒng)，可導(dǎo)致機(jī)體免疫機(jī)能下降繼發(fā)其它疾病。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供病毒RNA模板。
2. 雙酶一管式RT-PCR，操作簡(jiǎn)單快捷。
3. 本試劑盒足夠50次30uL體系的一管式RT-PCR反應(yīng)。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于在遇到問(wèn)題時(shí)分析原因。
5. 引物根據(jù)REV病毒保守的LTR序列設(shè)計(jì)，產(chǎn)物長(zhǎng)度為330bp。

產(chǎn)品組成：

組分	編號(hào)	規(guī)格(50T)
雙酶一管式RT-PCR Buffer，2×	BTN91202a	750μl
MMLV-Taq Mix	BTN91202b	100μl
RNase-free水	BTN80403	1mL
引物11-180602f	BTN11-180602f	1 OD
引物11-180602r	BTN11-180602r	1 OD
REV陽(yáng)性對(duì)照	BTN11-180602pc	50μl
超純水	BTN100935	1mL

保存條件：-20℃保存，有效期一年。

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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
SYA159	禽流感H9N1病毒雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒	48次/盒
SYA169	甲型/乙型/丙型流感病毒三重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒	48次/盒
SYA176	人副流感病毒3型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒	48次/盒
SYA177	人副流感病毒4型單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒	48次/盒
SYA187	人副流感病毒1型/3型雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒	48次/盒
SYA204	星狀病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒	48次/盒
SYA236	委內(nèi)瑞拉馬炎病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒	48次/盒

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名稱：禽流感H7N9病毒雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA151
規(guī)格：48次/盒

名稱：高致病性禽流感H5N2病毒雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA154
規(guī)格：48次/盒

名稱：禽流感H7病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA156
規(guī)格：48次/盒

名稱：甲型H1N1/甲型流感病毒雙重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA166
規(guī)格：48次/盒
一、簡(jiǎn)介
本試劑盒用一對(duì)甲型流感病毒特異性引物，一對(duì)甲型H1N1特異性引物，分別結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法雙重?zé)晒釸T-PCR技術(shù)對(duì)甲型流感病毒RNA、流感H1N1病毒RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。本試劑盒中甲型流感病毒的探針報(bào)告基團(tuán)為VIC/HEX/JOE，流感H1N1病毒的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM。

二、用途：
本試劑盒適用于檢測(cè)各種咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、組織樣品等臨床樣品中甲型流感病毒和H1N1亞型流感病毒?？捎糜诩仔土鞲胁《竞虷1N1亞型感染的輔助診斷、監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

二、試劑盒組成(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
甲型流感/H1N1熒光qRT-PCR反應(yīng)液(IAV-A/H1N1-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無(wú)核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1 管 50μL/管
陽(yáng)性對(duì)照(IAV-A/H1N1-PTC) 1 管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI7500熒光定量PCR檢測(cè)儀。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃。但不能超過(guò)6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
6.1.1 血清：用一次性無(wú)菌注射器抽取靜脈血2mL，注入無(wú)菌的干燥玻璃管，室溫(22-25℃)放置30-60min，血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清，或直接使用水平離心機(jī)，3000rpm離心5min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.2 血漿：用一次性無(wú)菌注射器抽取靜脈血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，5-10min后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.3 拭子、分泌物等樣品：在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水，劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無(wú)RNA酶污染的離心管中，6000rpm離心20s，取上清備用。
6.1.4 病灶組織樣品：稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理鹽水研磨至無(wú)塊狀物，然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液于1.5mL滅菌離心管中。
6.2 樣品RNA提取
可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光RT-PCR反應(yīng)液(IAV-A/H1N1-RT-PCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合液 1 μL N×1 μL
總量 15μL N×15μL
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(IAV-A/H1N1-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。總體系20μL。
7.2 real time RT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 45℃ for 10 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào) 報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM和VIC(若儀器無(wú)VIC通道，可選擇HEX或JOE通道)。其中FAM基團(tuán)檢測(cè)H1N1，VIC/HEX/JOE基團(tuán)檢測(cè)IAV-A，淬滅基團(tuán)均為None，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
（1） 陰性對(duì)照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道全部陰性。
（2） 陽(yáng)性對(duì)照(IAV-A/H1N1-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
8.3 結(jié)果判定
（1） FAM通道：Ct值≤35 H1N1亞型流感病毒核酸為陽(yáng)性；Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明H1N1亞型流感病毒核酸陰性。Ct值在35-40個(gè)循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明H1N1亞型流感病毒核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。
（2） HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤35 甲型流感病毒核酸為陽(yáng)性；Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明甲型流感病毒核酸陰性。Ct值在35-40個(gè)循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明甲型流感病毒核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
（1） 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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