無RNase的DNase溶液由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要無RNase的DNase溶液等RNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括無RNase的DNase溶液在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：無RNase的DNase溶液
英文名稱：RNase-Free DNase Solution
產(chǎn)品貨號：BTN90903
產(chǎn)品規(guī)格：500U

本產(chǎn)品是從牛胰DNase中精制的無RNase污染的DNase，專門用于降解RNA樣品中的DNA污染。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.，能使總RNA中的基因組DNA污染降低到電泳檢測不到的水平。
2. 同時降解單鏈DNA和雙鏈DNA。
3. 不含RNase，可以保證RNA分子完整性不受任何影響。
4.反應(yīng)條件經(jīng)過優(yōu)化，可以用于快速降解硅膠膜上吸附的DNA，也可以用于快速降解液體反應(yīng)體系中的DNA。
5.可以用于總RNA提取和體外轉(zhuǎn)錄中去除DNA。也可用于切口平移(Nick Translation)和DNase印跡法研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格
RNase-free DNase(1U/μL)	300μl
10×DNase Buffer	300μl
50mM EDTA溶液	300μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、去除RNA樣品中污染的基因組DNA(僅供參考，本試劑盒不含RNase-free DNase以外的所需試劑)
1.在一無RNA酶的離心管中配制50μl的反應(yīng)液：

成分	用量
RNA樣品	1μg
10×DNase Buffer	1μl
RNase-free DNase(1U/μL)	1μl
自備的RNase inhibitor(40U/μL)	0.5-1μL(可不加)
補(bǔ)超純水到	10μL

2. 混勻，短暫離心，37℃放置30分鐘；
3. 加入2μl 50mM EDTA溶液，65℃放置15分鐘。此步可以滅活DNase。RNA在加熱時容易水解，也可以使用酚/氯fǎng抽提去除DNase，然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上，也可以使用本公司的RNAadsorp
試劑盒進(jìn)行柱式純化，回收RNA。
4.電泳檢測是否去除了基因組 DNA，然后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

二、除去硅膠膜離心吸附柱上的DNA(僅供參考，本試劑盒不含 RNase-free DNase以外的所需試劑)
1.在柱式法提取過程中，完成洗滌步驟。
2. 配制 50μl DNase工作液。

成分	用量
10×DNase Buffer	5μl
RNase-free DNase(1U/μL)	10μl
自備的RNase inhibitor(40U/μL)	0.5-1μL(也可不加)
補(bǔ)超純水到	50μL

3. 加在離心吸附柱中間，室溫放置5-30分鐘。
4. 加入0.5mL自備洗柱液洗滌兩次。
5. 用RNA洗脫液洗脫即得無DNA的RNA樣品。

三、除去RNA體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的DNA模板(僅參考，本試劑盒不含RNase-free DNase以外的所需試劑)
1. 按2 U RNase-free DNase/μg DNA模板的比例在RNA體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中加入RNase-free DNase。注意：酶的zuì佳用量也許需要優(yōu)化。
2. 37℃放置15分鐘。
3. 加入2μl 50mM EDTA溶液，65℃放置15分鐘；此步可以滅活DNase。RNA在加熱時容易水解，也可以使用酚/氯fǎng抽提去除DNase，然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA在20μg以上，也可以使用本公司的RNAadsorp試劑盒(需另購)進(jìn)行柱式純化，回收RNA。

四、用于切口平移法(Nick Translation)DNA探針標(biāo)記(僅供參考，本試劑盒不含RNase-free DNase以外的所需試劑)
1. 按下表設(shè)置切口平移標(biāo)記反應(yīng)：

成分	用量
10×DNA聚合酶I緩沖液	2.5μl
3 dNTP mixture，1mM each	1.25μl
標(biāo)記核苷酸：非標(biāo)記核苷酸混合(3：7，1mM)	1μl
RNase-free DNase(0.002U/μL，見注)	1μl
DNA聚合酶 I(10U/μL)	0.5-1.5μl
模板 DNA	0.25μg
加水到	25μl

注：稀釋 RNase-free DNase的緩沖液為1×DNA聚合酶 I緩沖液：50mM
2. 15℃放置 15-60分鐘。
3. 加入10μl 50mM EDTA溶液。
4. 65℃放置 15分鐘滅活酶。
5. 所得探針可以純化后使用，也可以直接使用。


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名稱：柱式細(xì)菌RNA提取試劑盒
貨號：BTN80103
規(guī)格：50次
本試劑盒是細(xì)菌RNA提取試劑盒(BTN51102)的柱式升級產(chǎn)品，用于快速從各種常見的革氏陰性細(xì)菌中提取總RNA。如需提取革氏陽性細(xì)菌的RNA，可以選擇柱式真菌RNA提取試劑盒。跟細(xì)菌RNA提取試劑盒相比 它具有下列特點(diǎn):
1. 操作更加簡單快速，省去了zuì費(fèi)時的離心步驟。
2. 所得 RNA 純度更高，OD260/OD280一般在 2.0左右.
3.一般不含基因 DNA污染。
4.適用于各種革氏陰性細(xì)菌。
5. 高于進(jìn)口同類產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	30ml
溶液B	20ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步驟是針對在 1.5mL塑料離心管中進(jìn)行的微量提取的。

1. 新鮮配制裂解液。將溶液A和溶液B 按 1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B 混合后必須立即使用，不要放置，否則會產(chǎn)生沉淀。一次處理1.5mL左右的細(xì)菌需要0.6mL新鮮配制的裂解液(即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液)。
2.在 1.5mL塑料離心管中離心收集0.2-1.5mL 新鮮細(xì)菌。注意:由于細(xì)菌RNA 半衰期十分短，所以，必須使用zuì新鮮的、處于對數(shù)生長期的細(xì)菌。
3. 吸盡液體培養(yǎng)基，加入0.6mL 新配制的裂解液，用槍充分吹打細(xì)菌沉淀，確保細(xì)菌全部裂解，沒有塊狀物。
4. 將裂解物轉(zhuǎn)移至一個干凈的1.5mL塑料離心管中，然后加入0.2倍體積的自備氯fǎng(1mL 裂解物需 0.2mL 氯fǎng)，振蕩器上充分振蕩混均 30秒。
5. 12000～15000g室溫離心 3～5分鐘。
6. 將上清液(約0.6-0.8mL)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。注意：離心后下層有 機(jī)相和中間層含有 DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險起見，可以留下 100μL上清液不取。同時吸取上清時zuì好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見的絲狀 DNA。
7. 12000～15000g室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
8. 加 0.7mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。但如果樣品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重復(fù)此步一次。
9.室溫 12000～15000g離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會影響 RNA的使用。
10. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脫液。
11.室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做 Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使 用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
13. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之 間)檢測其在 OD260的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計算出 RNA的產(chǎn)量(濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
14. RNA 純度測定：無污染的總 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之 間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分 別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR等反應(yīng)。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是DNA污染嗎？
A：不是。用 TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳 RNA時容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，百奧萊博初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過堿基 互補(bǔ)或通過硼酸絡(luò)合(如果使用 TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加 RNase處理后，這些紅色熒光物(RNA)一般會消失。為避免此現(xiàn)象，建議 zuì好使用甲醛變性膠電泳和RNA 專用上樣液(如我們的RNAload)。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組 DNA？
A：如果懷疑有 DNA污染，可以用 RNase處理 RNA樣品，然后再電泳。如 果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組 DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用 PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用百奧萊博的非酶的DNA 去除劑 DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一 般都有殘留 RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用手冊進(jìn)行操作。

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