我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白，包括2×Ultra Taq Plus在內(nèi)的各類受體、細(xì)胞因子、生長因子、轉(zhuǎn)錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特別提示：包括2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix
產(chǎn)品貨號：JN0042
產(chǎn)品規(guī)格：0.5ml×5

  本制品是將PCR反應(yīng)所需的UltraTaq Plus DNA聚合酶、dNTP、MgCl2、反應(yīng)緩沖液以及優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，預(yù)先配制成2倍濃度的混合物。使用時只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，使用非常方便，并減少了產(chǎn)生污染的機(jī)會。
  2×UltraTaq Plus PCR MasterMix專為基因組DNA等復(fù)雜模板快速PCR擴(kuò)增檢測設(shè)計優(yōu)化，具有擴(kuò)增快速、高靈敏度、抗干擾能力強(qiáng)等，并具有一定的保真特性，能部分糾正DNA擴(kuò)增過程中所出現(xiàn)的錯誤。與2×UltraTaq DNA PCR MasterMix相比，具有擴(kuò)增長度增加（簡單模板 擴(kuò)增長度可達(dá)30kb,復(fù)雜模板可有效擴(kuò)增10kb), 保真度好的特點；與 2×Fast Pfu DNA PCR MasterMix相比，具有擴(kuò)增速度更快，擴(kuò)增靈敏度更高的優(yōu)點。
  使用本制品擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物具有3′端"A"突出，可直接克隆于 T-vector中。

產(chǎn)品用途：
1、可替代大部分UltraTaq DNA聚合酶的用途；
2、需高靈敏度的PCR擴(kuò)增；
3、大片段PCR擴(kuò)增反應(yīng) (可達(dá)30kb)。

常用反應(yīng)體系(50μl)：

組分	體積
2×PCR MasterMix*	25μl
上游引物	0.2-1.0μM(終濃度)
下游引物	0.2-1.0μM(終濃度)
dNTP(各10mM)	1.0μl
模板	1-50ng（質(zhì)粒）
	10ng-1μg(基因組)
ddH2O	至50μl
*Mg2+終濃度為2mM

常用PCR循環(huán)：

當(dāng)擴(kuò)增片段＜3K：
94℃	1分鐘30秒
30次循環(huán)	94℃，30秒 57℃，30秒 72℃ 根據(jù)產(chǎn)物長度調(diào)整，15秒/kb
72℃	3分鐘
4℃	保溫
當(dāng)擴(kuò)增片段≥3K（推薦引物長度≥30bp）：
94℃	1分鐘30秒
30次循環(huán)	94℃，5秒 68℃ 根據(jù)產(chǎn)物長度調(diào)整，15秒/kb
72℃	3分鐘
4℃	保溫

PCR MasterMix選購指南：

編號	產(chǎn)品名稱	特點
適用于菌落鑒定、菌液鑒定及常規(guī)PCR鑒定實驗的Mix系列
JN0030	2×Taq PCR MasterMix	高PCR Mix，使用簡便，擴(kuò)增靈敏度高
JN0034	2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0030改進(jìn)版，性能更均衡，適用面更廣
JN0040	2×Fast Taq PCR MasterMix	zuì快速的PCR試劑，常規(guī)PCR鑒定45分鐘內(nèi)知道結(jié)果
JN0035	2×RoomTop Taq PCR MasterMix	可放在手邊的PCR試劑，室溫穩(wěn)定存放60天
JN0036	2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	室溫穩(wěn)定存放60天，高速PCR試劑，常規(guī)PCR鑒定45分鐘內(nèi)知道結(jié)果
適用于一些較難擴(kuò)增的PCR條帶的鑒定及短片段克隆
JN0032	2×Taq Plus PCR MasterMix	擴(kuò)增效率更高及較好的保真度
JN0038	2×Hot Start Taq PCR MasterMix	采用熱啟動Taq，可獲得很好的特異性
JN0041	2×Ultra Taq PCR MasterMix	高速擴(kuò)增酶，優(yōu)化配方，解決PCR擴(kuò)增難題的，靈敏度高
高保真酶試劑，適用于長片段基因克隆
JN0031	2×Pfu PCR MasterMix	采用高保真酶，適用于基因克隆
JN0043	2×Fast Pfu PCR MasterMix	采用改良型高保真酶，更好的擴(kuò)增效果，4倍擴(kuò)增速度；擴(kuò)增迅速
防止PCR產(chǎn)物二次污染、高檢測靈敏度的PCR試劑
JN0047	2×PCR MasterMix(防污染)	采用dUTP/UDG酶系統(tǒng)，從根本上杜PCR產(chǎn)物二次污染
JN0033	2×Genotyping PCR Kit（nomal）	高檢測靈敏度，可達(dá)到普通PCR試劑102至104倍擴(kuò)增靈敏度

PCR MasterMix性能對比表：

名稱	編號	擴(kuò)增時間	擴(kuò)增長度	是否有3"-A	基因組擴(kuò)增
2×Taq PCR MasterMix	JN0030	1min/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Taq PCR MasterMix	JN0035	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0034	1min/kb	≤8kb	√	+
2×Fast Taq PCR MasterMix	JN0040	15s/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	JN0036	15s/kb	≤8kb	√	++
2×Ultra Taq PCR MasterMix	JN0041	15s/kb	≤8kb	√	+++
2×Taq Plus PCR MasterMix	JN0032	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix	JN0042	15s/kb	≤30kb	√	++++
2×Hot Start Taq PCR MasterMix	JN0038	1min/kb	≤8kb	√	++++
2×Hot Start Taq Plus PCR MasterMix	JN0039	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Pfu PCR MasterMix	JN0031	1min/kb	≤6kb	×	+
2×Fast Pfu PCR MasterMix	JN0043	30min/kb	≤12kb	×	+
2×SYBR Green Realtime PCR MasterMix	JN0049	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Genotyping PCR Kit（Normal）	JN0033	1min/kb	≤8kb	√	+++++
2×Genotyping PCR Kit（Fast）	JN0044	15s/kb	≤8kb	√	+++++
2×PCR MasterMix(防污染)	JN0047	1min/kb	≤8kb	√	+

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名稱：6nt隨機(jī)引物(0.5 ug/uL)
貨號：BTN100409
規(guī)格：5μg
本產(chǎn)品為長度為6nt的隨機(jī)引物，序列為5′-(NNNNNN)-3′，主要用于以任何RNA為模板合成cDNA，也可以用于DNA探針的隨機(jī)引物標(biāo)計。

儲存條件：低溫運(yùn)輸和-20℃保存，有效期一年。

疑難解答：
Q：在合成cDNA時，使用Oligo dT12-18和用隨機(jī)引物有何區(qū)別？
A：只有當(dāng)以帶polyA尾巴的RNA作為模板才能使用Oligo dT作為引物，而任何RNA模板都可以使用隨機(jī)引物。使用后者的序列覆蓋率比使用Oligo dT更高。

名稱：核酸稀釋液，測OD專用
貨號：BTN131179
規(guī)格：250mL
測定核酸的OD需要一定的pH和鹽濃度，本產(chǎn)品就是根據(jù)這一特點開發(fā)的、專門用于溶解和稀釋核酸樣品的溶液。

儲存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

名稱：PCR試劑盒(含Taq酶，Buffer，dNTP，上樣液)
貨號：YT379
規(guī)格：400次|2000次
本PCR試劑盒帶有Taq DNA Polymerase（YT371）、PCR buffer、dNTP和上樣緩沖液，自備模板和引物即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，適合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量檢測，也可以用于不太長的的DNA片段的克隆。本試劑盒用于50微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于160個反應(yīng)，用于20微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于400個反應(yīng)。

產(chǎn)品組份：
Taq DNA Polymerase(5U/μl)————200U
10×PCR Buffer(with Mg2+)————1ml
dNTP(2.5mM each)—————————0.7ml
6×DNA Loading Buffer——————1ml

儲存條件：-20℃。

名稱：Bes Taq DNA Polymerase
貨號：WE0103
規(guī)格：500U|2500U
  Bes Taq DNA Polymerase具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切核酸酶活性。在普通的PCR條件下，與Taq DNA Polymerase相比，具有擴(kuò)增效率高、錯配率低的優(yōu)良性能，兼具有Taq DNA Polymerase的高擴(kuò)增效率和Pfu DNA Polymerase的高保真性。使用本品擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物3"端附有一個“A”堿基，因此可直接用于T/A克隆。本產(chǎn)品適用于常規(guī)的PCR反應(yīng)和對保真性有要求的基因克隆等反應(yīng)。

產(chǎn)品組成：

組份	500 U	2500U
Bes Taq DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl	5×100μl
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml

活性定義：
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內(nèi)，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個活性單位(U)。

質(zhì)量控制：
1、經(jīng)過多次柱純化，SDS-PAGE檢測其純度大于99%；
2、經(jīng)檢測無外源核酸酶活性；
3、PCR方法檢測無宿主殘余DNA；
4、能有效地擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因；
5、室溫存放一個月，無明顯活性改變。

使用方法：
以下舉例為以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段的PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

1、PCR反應(yīng)體系

試劑	50μl反應(yīng)體系	終濃度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
Bes Taq DNA Polymerase，5 U/μl	0.25-0.5μl	1.25-2.5U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物濃度請以終濃度0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

2、PCR反應(yīng)條件

步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	2min
變性	94℃	30s	25-35個循環(huán)
退火	55-65℃	30s
延伸	72℃	30s
終延伸	72℃	2min

注意：
1)一般實驗中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
2)延伸時間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，本產(chǎn)品Bes Taq DNA Polymerase的擴(kuò)增效率為2 kb/min。
3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯配機(jī)率會增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。

儲存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。

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BTN90302 25mM氯化鎂溶液(PCR級MgCl2溶液) 5mL
BTN70905 2%明膠溶液(PCR級) 1.5mL
BTN131227 10nt隨機(jī)引物(0.5μg/uL) 250
YT373 YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer) 200U|1000U
WE0104 2×Bes Taq MasterMix(含染料) 1ml|5ml|25ml
WE0113 BaHF高保真DNA聚合酶 500U|2500U
WE0115 尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶) 200U|1000U

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