北京百奧萊博供應(yīng)的雙酶一管式RT-PCR試劑盒用于科學(xué)研究，我公司的雙酶一管式RT-PCR試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)
英文名稱：Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN91202
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本產(chǎn)品是經(jīng)過精心優(yōu)化的、基于MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq DNA聚合酶的雙酶一管式RT-PCR試劑盒，它含有除模版RNA和其專一性引物以外的所有RT-PCR試劑，包括MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR緩沖液等，可以在同一反應(yīng)管內(nèi)完成RNA→cDNA→PCR反應(yīng)(RT-PCR反應(yīng))。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.一管式完成RT-PCR反應(yīng)，避免樣品交叉污染。
2. 即開即用，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備RT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個(gè)RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，將加樣步驟減少到zuì低，大降低了加樣誤差，增加了可重復(fù)性。
4. 使用范圍廣，適用于從病毒RNA 到人RNA的各種RNA 模板。
5.高靈敏度，每個(gè)RT-PCR 體系z(mì)uì低可以檢測(cè)200拷貝的RNA分子，可擴(kuò)增的模版RNA的zuì長達(dá)2000nt。
6. 所得RT-PCR產(chǎn)物可以直接用于AT克隆。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：所有離心管用前zuì好全部短暫離心幾秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一個(gè)30μL 體系的RT-PCR 為例，如果體積不同，各成分用量需要適當(dāng)調(diào)節(jié)。
1.在一干凈的無RNase的PCR管中，先加入下列成分：

成分	陰性對(duì)照	樣品
RNA模板(自備，分下面三種情況)	無	見下
總RNA	無	100-500ng
或poly(A)mRNA	無	10-500ng
或體外轉(zhuǎn)錄得到的專一RNA	無	0.01 pg-500ng
RNA特異性引物一(自備)	終濃度300nM	終濃度300nM
RNA特異性引物二(自備)	終濃度300nM	終濃度300nM
探針(僅對(duì)Realtime RT-PCR)	終濃度200nM	終濃度200nM
RNase-free水	補(bǔ)到13μL	補(bǔ)到13μL
雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×)	15μl	15μl
MMLV-Taq Mix	2μl	2μl

注：通常初次使用本試劑時(shí)，可用引物濃度300nM，探針濃度200nM進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體情況，在200～800nM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度，在50～400nM 范圍內(nèi)調(diào)整探針濃度以達(dá)到zuì佳檢測(cè)效果。引物、探針、待檢樣品的具體加量用戶可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整，同時(shí)增減DEPC 水用量，保證總反應(yīng)體積不變即可。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR 儀中進(jìn)行RT-PCR。
3. 設(shè)定RT-PCR反應(yīng)條件時(shí)，一般將RT的條件設(shè)定成42℃，30 鐘，后接94℃變性5分鐘，然后進(jìn)入PCR循環(huán)(PCR參數(shù)將根據(jù)自備引物的Tm 值由用戶自行決定注)、zuì后72℃，5分鐘。對(duì)Realtime PCR，在復(fù)性步驟設(shè)置熒光檢測(cè)，檢測(cè)通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR結(jié)束后取5-10μL電泳檢查。

注意事項(xiàng)：
1. 使用已校準(zhǔn)的移液器，選用一次性PCR反應(yīng)管、離心管、tip 頭等進(jìn)行樣本處理及配液等操作，所有用具應(yīng)不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探針設(shè)計(jì)過程中應(yīng)盡可能避免發(fā)夾結(jié)構(gòu)、二聚體等現(xiàn)象的發(fā)生，探針的位置盡可能靠近上游引物，PCR 目標(biāo)片段zuì好小于200bp，盡可能在150bp以內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)樣品盡可能新鮮，提取過程應(yīng)嚴(yán)防RNA酶污染及操作不當(dāng)導(dǎo)致的RNA 降解。
4. 使用本產(chǎn)品時(shí)建議對(duì)RT-PCR擴(kuò)增條件、引物濃度和樣品用量進(jìn)行調(diào)整，選擇zuì適當(dāng)?shù)囊餄舛?、樣品濃度和PCR擴(kuò)增條件。
5. 本產(chǎn)品使用前應(yīng)在室溫充分融解，并用漩渦震蕩器充分混勻。
6. 統(tǒng)一配液后分裝以減少加樣誤差，每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰性對(duì)照。
7. 禁止標(biāo)記PCR反應(yīng)管，避免外源性熒光信號(hào)干擾。
8. PCR反應(yīng)管中不能有氣泡，否則會(huì)產(chǎn)生非特異的熒光信號(hào)。若有氣泡，可先用手指將氣泡彈破，然后再低速離心消除。
9. 實(shí)時(shí)熒光PCR 儀器連續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，zuì好間隔一小時(shí)以上再使用。
10. 實(shí)時(shí)熒光PCR 儀需經(jīng)常校正和清潔載樣板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM熒光PCR 儀，應(yīng)將毛細(xì)管放在專門套管中，以便分裝反應(yīng)體系和加入待檢樣品。前述操作完畢應(yīng)低速離心數(shù)秒再將毛細(xì)管垂直緩慢放入樣品架，以免折斷；若發(fā)生折斷，應(yīng)小心取出，用專用小毛刷擦拭干凈后方可進(jìn)行擴(kuò)增。
12. 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)，避免PCR產(chǎn)物污染。

根據(jù)您的關(guān)注的雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：

貨號(hào)	名稱	規(guī)格
BTN91202	雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)	50次
BTN100203	通用型LAMP試劑盒	50次
WE0106	2×BAmp MasterMix(含染料)	5ml
WE0108	2×Pfu MasterMix(含染料)	5ml
WE0129	一步法RT-PCR試劑盒	100次
WE0145	實(shí)時(shí)熒光定量PCR的預(yù)混體系(探針法)(低含量ROX校正染料)	5ml

關(guān)注雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)，的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：



名稱：DMSO，PCR級(jí)
貨號(hào)：BTN80205
規(guī)格：1.5mL
大量實(shí)驗(yàn)顯示5-10%的DMSO能夠促進(jìn)PCR反應(yīng)，尤其是高GC模板的PCR反應(yīng)，本產(chǎn)品就是專門用于PCR或RT-PCR的高純度DMSO。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。

名稱：硫酸鎂溶液(PCR級(jí)MgSO4溶液)
貨號(hào)：BTN130840
規(guī)格：5mL
本產(chǎn)品為專門用于PCR的MgSO4溶液，濃度10mM，可以用于調(diào)節(jié)MgSO4的zuì佳濃度。MgSO4為常用的PCR增強(qiáng)劑之一。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

名稱：25mM氯化錳溶液(PCR級(jí)MnCl2溶液)
貨號(hào)：BTN130307
規(guī)格：5mL
本產(chǎn)品為專門用于易錯(cuò)PCR的MnCl2水溶液，濃度為25mM，可用于調(diào)節(jié)MnCl2的zuì佳濃度。由于Mg2+在PCR過程中可以穩(wěn)定非互補(bǔ)的堿基對(duì)，Mn2+能夠降低聚合酶對(duì)模板的特異性，因而調(diào)整兩種離子的濃度，可獲得不同突變頻率的多樣性文庫。

氯化錳分子量為125.8，CAS號(hào)為7773-01-5，水合氯化錳外觀為玫瑰色單斜晶體；無水氯化錳外觀為桃紅色結(jié)晶。密度為2.977g/cm3。熔點(diǎn)是650℃。在高于熔點(diǎn)溫度下升華。沸點(diǎn)1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存，有效期一年。

名稱：即用型高保真PCR試劑盒
貨號(hào)：BTN90708
規(guī)格：1.5mL
本產(chǎn)品是即用型的2×高保真PCR預(yù)配反應(yīng)液，含有除引物、模板以外的所有PCR試劑，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等，特別適合于高保真PCR反應(yīng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. Pfu DNA聚合酶是使用zuì廣泛的高保真酶，其保真度為普通Taq酶的10倍。
2. 使用時(shí)只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，非常方便，簡化了PCR的準(zhǔn)備工作。
3. PCR反應(yīng)所必需試劑全集于一管之中，數(shù)分鐘即可完成反應(yīng)體系配置。由于加樣過程少，有利于減少污染，降低實(shí)驗(yàn)誤差。
4. 本產(chǎn)品A型含電泳染料，PCR反應(yīng)液可直接上樣電泳，進(jìn)一步簡化了操作。
5. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。
6.適用于基因的高保真擴(kuò)增和基因定點(diǎn)突變等實(shí)驗(yàn)，得到的PCR產(chǎn)物可用于平末端克隆。

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為12個(gè)月。

使用方法：
將本產(chǎn)品與用戶自備的模板，引物混合液按下列推薦使用量(30μL反應(yīng)體系)加入PCR 管中即可進(jìn)行PCR，反應(yīng)結(jié)束后直接取5-15μL電泳檢查擴(kuò)增結(jié)果。如果反應(yīng)體系不是30μL，各成分需要按比例增加或減少。

試劑		加入量
2×高保真PCR MagicMix		25μL
DNA模板(自備)	哺乳動(dòng)物基因組DNA	0.5-1μg
	酵母基因組DNA	5-500ng
	細(xì)菌基因組DNA	0.5-50ng
	質(zhì)粒DNA	5-500ng
	PCR回收片段	1-100pg
PCR引物(自備)		10-20pmol each
補(bǔ)水到		30μL

參考擴(kuò)增條件：

預(yù)變性	94℃	4min
PCR(30個(gè)循環(huán))	94℃	30s
	50℃	30s
	68℃	0.5kb/min
延伸	68℃	10min

注意事項(xiàng)：
1. 本產(chǎn)品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反應(yīng)速率低，因此我們推薦的擴(kuò)增延伸反應(yīng)時(shí)間為每kb 需2 分種。
2. Pfu酶3′-5′外切酶活性可降解引物，所以強(qiáng)烈建議在冰上配置完成PCR反應(yīng)液后，立即放入PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增完畢后立即進(jìn)行電泳檢測(cè)。
3. 本產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，不可以直接進(jìn)行TA 克隆，可以使用ClionB載體(BTN51104)進(jìn)行克隆。如需要進(jìn)行TA克隆，建議對(duì)PCR產(chǎn)物純化后，用加A 試劑盒(BTN60105)加A后再進(jìn)行TA克隆。
4. 由于Pfu 無 5′到 3′外切酶的活性，所以本試劑盒不能用于實(shí)時(shí)熒光PCR。

疑難解答：
Q：為何Pfu DNA Polymerase擴(kuò)增效率不如Taq DNA Polymerase？
A：一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3′-5′的外切活性，所以在合成過程中，該酶會(huì)隨時(shí)校對(duì)新添加的核苷酸是否配對(duì)，影響了合成效率；二是它能通過3′-5′的外切活性使引物部分降解，降低引物結(jié)合模板的能力，進(jìn)而影響擴(kuò)增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q：使用本產(chǎn)品時(shí)還有哪些注意事項(xiàng)？
A：1.引物長度和濃度一般應(yīng)比常規(guī)的PCR 長和高(考慮到被Pfu DNA Polymerase的3′-5′的外切活性降解的因素)；
 2.zuì好在反應(yīng)前加Pfu DNA Polymerase。

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