ALH223 Pfu DNA聚合酶

Pfu DNA聚合酶的品牌是百奧萊博,是優(yōu)質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品,本制品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域,本品質(zhì)量穩(wěn)定,價(jià)位合理,需要Pfu DNA聚合酶等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的客戶,請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
特別提示:包括Pfu DNA聚合酶在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:Pfu DNA聚合酶
英文名稱:Pfu DNA Polymerase
產(chǎn)品貨號(hào):ALH223
產(chǎn)品規(guī)格:500U|3000U
本酶用于DNA的高保真擴(kuò)增,如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變分析(SNP)和平末端補(bǔ)平等。是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase 基因的大腸桿菌中分離純化的, Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性,能糾正DNA擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生的堿基錯(cuò)配。Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐高溫DNA Polymerase中出錯(cuò)率zuì低的。其PCR產(chǎn)物為平端,可直接用平端載體克隆。 高保真PFU對(duì)于dNTP純度要求很高,因此建議用本酶配套的超純dNTP mix。本酶濃度為5U/μl。
本品組份(500U):
Pfu DNA Polymerase———————————————500U
10×Pfu Buffer+(with MgSO4)-——————————1ml
SuperPure dNTP mix(10 mM Each)—————————0.2ml
單位定義:一個(gè)單位Pfu DNA Polymerase活力定義為在74℃、30分鐘內(nèi),以活性化的大馬哈魚(yú)精子DNA作為模板引物,將10nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
質(zhì)量控制:SDS-PAGE檢測(cè)純度大于99%,經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶活性;PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余DNA,能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因;室溫存放一周,無(wú)明顯活性改變。
酶貯存緩沖液:50mM Tris-HCl(pH 8.2),0.1mM EDTA,1mM DTT,Stabilizers,50% glycerol。
10×Pfu Buffer (含Mg2+):200 mM Tris-HCl (pH8.8),100 mM KCl,100 mM(NH4)2 SO4,20 mM MgSO4,其他成分。
注意事項(xiàng):
(1) Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性,所以Pfu酶擴(kuò)增時(shí)延伸速度比Taq酶低,應(yīng)根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度設(shè)置相應(yīng)的延伸時(shí)間,建議Pfu酶的延伸速度為每分鐘1kb 如擴(kuò)增片段小于4kb;延伸速度為每分鐘0.5kb 如擴(kuò)增片段大于4kb。同時(shí)Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物, 所以應(yīng)先加dNTP 后,再加Pfu酶到反應(yīng)體系中,并立即進(jìn)行PCR 反應(yīng)。
(2) 用Pfu酶擴(kuò)增時(shí),引物的純度要求較高,引物長(zhǎng)度大于18個(gè)堿基,Tm在55~80℃ 之間,引物濃度在0.1~0.5μM之間,比Taq酶略高。
(3) Pfu酶的熱穩(wěn)定性比Taq酶好,對(duì)于GC含量很高的模板,變性溫度可以提高到98℃,對(duì)Pfu酶的活性無(wú)影響。
(4) 高保真PFU 對(duì)于dNTP純度要求很高,因此建議用本酶配套的超純dNTP mix。
儲(chǔ)存條件:-20℃。
本制品別名:pfu酶
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