ZN1944 超敏化學(xué)發(fā)光底物(A液+B液)

超敏化學(xué)發(fā)光底物(A液+B液)是高品質(zhì)的免疫檢測(cè)產(chǎn)品,由北京百奧萊博供應(yīng),本產(chǎn)品用于科學(xué)研究,本品質(zhì)量穩(wěn)定,價(jià)位合理,需要超敏化學(xué)發(fā)光底物(A液+B液)等免疫檢測(cè)產(chǎn)品的客戶,請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
特別提示:包括超敏化學(xué)發(fā)光底物(A液+B液)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:超敏化學(xué)發(fā)光底物(A液+B液)
產(chǎn)品貨號(hào):ZN1944
產(chǎn)品規(guī)格:1盒
產(chǎn)品保存:4℃密封避光保存,一年有效
產(chǎn)品說(shuō)明:Western blot 底物發(fā)光檢測(cè)試劑是一種高靈敏度的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物試劑,采用獨(dú)特的發(fā)光底物系統(tǒng),并對(duì)成份進(jìn)行了優(yōu)化。產(chǎn)品背景低,穩(wěn)定性好,信號(hào)的靈敏度及強(qiáng)度高,發(fā)光時(shí)間持久。比普通 ECL 試劑敏感度高數(shù)十倍。用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶 HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原??梢造`敏地檢測(cè)出目的蛋白的存在。它由辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化發(fā)生化學(xué)反應(yīng),發(fā)出熒光,可對(duì)×光膠片曝光,也可直接進(jìn)行 lμminometer 檢測(cè)或者熒光 CCD 掃描。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.高信噪比,背景低。
2.發(fā)光迅速。
3.可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作。
4.靈敏度高:可檢測(cè) femto 級(jí)抗原。
5.發(fā)光持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),可進(jìn)行反復(fù)曝光,進(jìn)行結(jié)果優(yōu)化,而不需重復(fù) Western blot。
6.節(jié)約抗體,包括一抗二抗。超敏化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑因靈敏度高,可使用較高抗體稀釋比例。一抗稀釋 1:1000-1:5000或0.2-1.0μg/ml ;二抗稀釋 1:20000-1:100000或10-50ng/ μl。
使用方法:
1.執(zhí)行常規(guī) SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和 Western Blot 步驟。
2.膜的封閉:用 TBS-T 液洗滌印跡膜 10minX2。放入 5%脫脂奶粉封閉液內(nèi),搖床震動(dòng),室溫封閉1小時(shí)。
3.一抗孵育:去除封閉液,并加入稀釋好的一抗,用搖床震動(dòng),室溫孵育2h或4℃孵育過(guò)夜。
注意:zuì好使用推薦的一抗稀釋比例,稀釋一抗使用封閉液稀釋。
4.用 4-6倍 TBS-T洗滌印跡膜,10minX3。增加洗液量,和/或洗膜的次數(shù)可降低背景。
注意:洗滌之前,用 TBS-T洗液將印跡膜進(jìn)行簡(jiǎn)單的漂洗,將會(huì)增加洗膜的效果。
5.二抗孵育:將一抗孵育后的印跡膜放入適當(dāng)稀釋的HRP 標(biāo)記的二抗中孵育,搖床震動(dòng),室溫孵育2 小時(shí)。
注意:zuì好使用推薦的HRP 標(biāo)記二抗的稀釋比例,稀釋二抗使用封閉液稀釋。
6.重復(fù)第 4 步,以去除非特異性 HRP 標(biāo)記二抗的結(jié)合。
注意:與 HRP 標(biāo)記二抗孵育后,必須徹底地清洗印跡膜。
7.制備工作液:按每 1 ml 蒸餾水加 A 液和 B 液各 50μι,混勻組成作液即可使用。用量以充分覆蓋印跡膜為基準(zhǔn)。每10cm2膜需要大約1ml工作液。
8.將印跡膜有蛋白的一面朝上平整的鋪在一張平板上,加上配好的發(fā)光底物工作液。
9.將印跡膜與工作液孵育1-5min。
注意:孵育的時(shí)間可以在暗室里觀察,以判斷是否進(jìn)行膠片曝光。
10.將一潔凈的保鮮膜或透明的玻璃紙平整的鋪在孵育有工作液的印跡膜上,只要保鮮膜或透明的玻璃紙比較大可以不用吸除多余的工作液,輕輕趕出其間的氣泡。
11.在暗室中取一張×膠片小心置于膜上,曝光 5 秒至 1分鐘,立即顯影定影。
注意:根據(jù)其發(fā)光的強(qiáng)度,縮短或延長(zhǎng)×片的曝光時(shí)間(對(duì)微弱信號(hào),曝光時(shí)間可延長(zhǎng)至數(shù)小時(shí)),或者曝光一系列不同的時(shí)間后再顯影定影挑選一張滿意的。也可用合適的照相器材直接記錄蛋白膜的化學(xué)發(fā)光圖像。工
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