北京百奧萊博供應的2×Long PCR Maste用于科研試驗，我公司專注于核酸擴增(PCR)產品的研發(fā)、生產和供應，為您提供的2×Long PCR Maste質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括2×Long PCR Master Mix(含染料)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：2×Long PCR Master Mix(含染料)
英文名稱：2×Long PCR Master Mix (With Dye)
產品貨號：SY0031
產品規(guī)格：5×1mL

Long PCR Master Mix (With Dye)包含Long Taq DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進行擴增，大大簡化實驗的操作步驟，提高了高通量操作和實驗結果的重現(xiàn)性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase與一種含有3’→5’外切酶活性（校對活性）的蛋白組成的混合酶，保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合獨特的緩沖體系，Long Taq DNA Polymerase可從人基因組模板中擴增長達15 kb的片段。

Mix中含有電泳緩沖液和溴酚藍染料，可在反應結束后直接進行電泳，使用方便。其中的保護劑使得Mix 經過反復凍融后仍可保持穩(wěn)定的活性。PCR產物的3’端帶A，可輕松克隆至T載體。

質量控制
核酸外切酶殘留檢測：20μl本品和0.6μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小時，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸內切酶殘留檢測：20μl本品和0.6μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小時，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測: 50μl體系中，以ddH2O為模板，擴增E.coil 16s rDNA基因。35個循環(huán)后擴增產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。
功能檢測：50μl體系中，以100ng人基因組DNA為模板擴增dystrophin基因。30個循環(huán)后取10% PCR產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，觀察到單一的15Kb條帶。

根據(jù)您的關注的2×Long PCR Master Mix(含染料)，您可能還對以下產品有需求：


BTN70909 PCR級綠如藍DNA染料 0.1mL
BTN91107 SP6體外轉錄試劑盒 50次
YT387 dGTP溶液(100mM) 250μl
WE0113 BaHF高保真DNA聚合酶 500U|2500U
WE0134 SuperSYBR Mixture(低含量ROX校正染料) 1ml|5ml
WE0150 一步法逆轉錄實時熒光定量PCR試劑盒(高含量ROX校正染料) 100次
WE0152 快速實時熒光定量PCR的預混體系(熒光探針)(低含量ROX校正染料) 5ml

關注2×Long PCR Master Mix(含染料)，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產品：



名稱：即用型易錯PCR試劑盒
貨號：BTN101005
規(guī)格：100次
本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯PCR而開發(fā)。易錯PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法，則可從構建的突變庫選出所需突變體。

產品特點：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的優(yōu)越性。
2. 配方經過精心優(yōu)化，突變率穩(wěn)定，突變沒有趨向性。易錯PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單，但如果在PCR引物中設計位點，則可使產物克隆到表達載體，也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4.可用于連續(xù)易錯PCR，只需把上一次易錯PCR的產物用作下一次易錯PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增1kb以下的產物，對于1kb以上的產物，建議分段擴增。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易錯PCR Mix，10×	300μl
易錯PCR專用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為一年。

使用方法：
1.以30μL的標準PCR反應體系為例，如果反應體系不是30μL，各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分：

易錯PCR Mix,10×	3μl
易錯PCR 專用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自備DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自備，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
補水到	30μl

2. 按已經優(yōu)化的PCR條件進行一定循環(huán)數(shù)的PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件：

PCR前變性	94℃ 3分鐘
易錯PCR	94℃ 1分鐘	循環(huán)30次(見注)
	45℃ 1分鐘
	72℃ 1分鐘

注：易錯PCR一般不需要熱啟動，也不需要在PCR結束后做延伸處理。

循環(huán)次數(shù)與突變幾率的關系
易錯PCR循環(huán)次數(shù)決定每個核苷酸位置的突變幾率，進而決定每個PCR產物可能得突變位點數(shù)，所以所需循環(huán)數(shù)由客戶根據(jù)需要改動。

PCR循環(huán)數(shù)	每個堿基突變幾率	PCR終產物中的突變位點數(shù)
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.電泳檢測是否得到預計長度的PCR產物。

疑難解答：
Q：易錯PCR與定點突變PCR有什么區(qū)別？
A：定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組，也可以是質粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化)，包括堿基的添加、刪除、點突變等。它需要預先知道靶基因的序列。易錯PCR是一種隨機突變，它不需要預先知道靶基因的序列(引物結合部分除外)，但需要后續(xù)的篩選方法篩選自己所需要的突變。
Q：易錯PCR的錯誤率是多少？
A：易錯PCR的突變率為0.66%(±0.13%)，對500bp的PCR產物，相當于有4%的PCR片段為野生型，12%的含一個突變，20%的含兩個突變，22%的含三個突變，18%的含四個突變，12%的含五個突變，12%的含六個或更多突變。
Q：如果需要每個核苷酸有高于0.66%的突變率，如何辦？
A：可以使用連續(xù)多次易錯PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產物作為第二輪易錯PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進行)。

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