二代測(cè)序接頭引物試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶(hù)稱(chēng)道，了解更多二代測(cè)序接頭引物試劑盒等基因結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢(xún)訂購(gòu)。...

特別提示：包括二代測(cè)序接頭引物試劑盒(Illumina平臺(tái) Index Primer13-24)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：二代測(cè)序接頭引物試劑盒(Illumina平臺(tái) Index Primer13-24)
英文名稱(chēng)：NGS Multiplex Oligos For Illumina(Index Primers Set II)
產(chǎn)品貨號(hào)：WE0240
產(chǎn)品規(guī)格：24次|96次

  本試劑盒提供了二代測(cè)序建庫(kù)中使用的adaptor與primer，專(zhuān)為illumina平臺(tái)建庫(kù)設(shè)計(jì)，index primer的設(shè)計(jì)可滿(mǎn)足多重高通量測(cè)序時(shí)制備多個(gè)文庫(kù)樣本的需要，制備的文庫(kù)可用于Illumina GAIIx，HiSacnSQ、HiSeq 2500/2000/1000和MiSeq sequencing等測(cè)序平臺(tái)的測(cè)序。

試劑盒組成：

組份	24次	96次
Adaptor for Illumina	60μl	240μl
Universal Primer for Illumina	30μl	120μl
Index 13 -27 Primers for Illumina	12×10 μ l	12×20 μ l

自備儀器、試劑和耗材
1、磁力架：建議使用DynaMagTM-2(貨號(hào)： 12321D)。
2、DNA純化回收試劑盒：建議使用百奧萊博磁珠法DNA純化回收試劑盒(貨號(hào)： WE0205)。
3、DNA建庫(kù)試劑盒：建議使用百奧萊博二代測(cè)序快速DNA建庫(kù)試劑盒(貨號(hào)： WE0229)。
4、無(wú)水乙醇。
5、反應(yīng)管：建議使用低吸附的PCR管與1.5ml離心管；槍頭：建議使用高質(zhì)量過(guò)濾槍頭防止試劑盒、文庫(kù)樣本污染。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)：
1、Adaptor為雙鏈結(jié)構(gòu)，請(qǐng)勿將其置于室溫溫度以上，以免發(fā)生解鏈、影響使用。
2、Index primer開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，使液體收集到管底，以免不同引物間交叉污染。

使用流程


操作步驟：

百奧萊博二代測(cè)序多樣本接頭引物試劑盒使用方法請(qǐng)按照百奧萊博二代測(cè)序快速DNA建庫(kù)試劑盒(Cat .No.WE0229)protocol進(jìn)行。

Adaptor for Illumina：
5′-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3′
5′-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3′
Universal Primer for Illumina：
5-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T -3′
Index 13–27 Primers for Illumina：

	Index Primers for Illumina	Index
Index 13 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATTGTTGACTGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	AGTCAA
Index 14 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATACGGAACTGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	AGTTCC
Index 15 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATTCTGACATGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	ATGTCA
Index 16 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGGGACGGGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	CCGTCC
Index 18 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATGTGCGGACGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GTCCGC
Index 19 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGTTTCACGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GTGAAA
Index 20 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATAAGGCCACGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GTGGCC
Index 21 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATTCCGAAACGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GTTTCG
Index 22 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATTACGTACGGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	CGTACG
Index 23 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATATCCACTCGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GAGTGG
Index 25 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATATATCAGTGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	ACTGAT
Index 27 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATAAAGGAATGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	ATTCCT

儲(chǔ)存條件：-20℃

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BTN101105 5′RACE試劑盒 10次
ZN0012 Acetylcholine Receptor a1 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0081 APOLYGUS mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0153 BrMS1 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0284 CHK 2 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0302 CNTFRα mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0369 Cyp1A1 mRNA原位雜交試劑盒 100T
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關(guān)注二代測(cè)序接頭引物試劑盒(Illumina平臺(tái) Index Primer13-24)，的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：



名稱(chēng)：人基因組DNA定量試劑盒
貨號(hào)：WE0230
規(guī)格：1ml|5ml
  本產(chǎn)品是采用探針?lè)ㄟM(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)，實(shí)現(xiàn)對(duì)從各種樣品(石蠟樣本、流式分選的細(xì)胞、血清或血漿樣本及少量臨床樣本等)中抽提的DNA進(jìn)行濃度和質(zhì)量的準(zhǔn)確檢測(cè)。產(chǎn)品提供了qPCR過(guò)程中所需的全套試劑，包括反應(yīng)混合液，引物混合物，標(biāo)準(zhǔn)品，只需添加提取好的DNA即可開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，操作簡(jiǎn)單方便、省時(shí)省力。反應(yīng)混合物使用了、快速的熱啟動(dòng)BaldStar Taq DNA Polymerase，擴(kuò)增靈敏度高，特異性好，縮短了程序反應(yīng)的時(shí)間。
  ROX染料用于校正定量PCR儀孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 擴(kuò)增儀。不同儀器的激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)有所不同，因此ROX染料的濃度必須與相應(yīng)的熒光定量PCR儀相匹配。
  不需要ROX校正的儀器：Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的儀器：ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的儀器：ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

名稱(chēng)：ALDH1 mRNA原位雜交試劑盒
貨號(hào)：ZN0050
規(guī)格：100T
基本信息：
保存條件：4℃保存一年
工作量：100張切片。
有效期：一年。
適用種屬：human
標(biāo)記方式：3’—尾段標(biāo)記
試劑盒中內(nèi)容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.預(yù)雜交液 2ml；
3.ALDH1 mRNA原位雜交試劑盒寡核苷酸探針雜交液 2ml；
4.封閉液 5ml；
5.生物素化鼠抗dì高辛 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化過(guò)氧化物酶 5ml。
用戶(hù)自備試劑：
原位雜交專(zhuān)用蓋玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
緩沖液(3%檸檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位雜交用 PBS)
一．培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片
準(zhǔn)備工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%檸檬酸——100ml蒸餾水中加檸檬酸(C6H8O7?H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸餾水中加氯化鈉17.6g，檸檬酸三鈉(C6H5O7Na3?2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸餾水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸餾水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸餾水即可。
原位雜交用PBS(1000ml蒸餾水加氯化鈉30g,Na2HPO4?12H2O 6g,NaH2PO4?2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：zuì重要的是及時(shí)固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對(duì)mRNA的分解作用。此外，過(guò)度固定對(duì)原位雜交有明顯的不利影響。
1．玻片的處理：一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．細(xì)胞在多聚賴(lài)氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng)，條件為37℃和5%的CO2，所用培養(yǎng)基為Dulbecco基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細(xì)胞長(zhǎng)好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3．培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片均可用下述方法固定：固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌，干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+純甲醇50份混合，室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7．預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體，不洗。
8．雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專(zhuān)用蓋玻片的保護(hù)膜揭開(kāi)后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。
9．雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗
11.滴加生物素化鼠抗dì高辛：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加生物素化過(guò)氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標(biāo)本上。一般顯色20-30分鐘。若無(wú)背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時(shí)蘇木素復(fù)染，充分水洗。
16.酒精脫水，二甲苯透明，封片。
二．石蠟切片
如果有條件的話(huà)，應(yīng)盡可能地采用新鮮標(biāo)本。標(biāo)本離體后，及時(shí)予以固定。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。標(biāo)本較大時(shí)用刀片切成厚度不超過(guò)4mm的小塊，固定1小時(shí)即可，較大的標(biāo)本固定不要超過(guò)2小時(shí)。某些組織對(duì)過(guò)度固定尤其敏感，如動(dòng)物大腦，固定時(shí)間30-40分鐘，一般不要超過(guò)1小時(shí)。
1．常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的處理：一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。
3．石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化3--30分鐘(視標(biāo)本新舊、厚薄自行調(diào)整)。用戶(hù)可以比較不同的消化時(shí)間，例如5分鐘,10分鐘，20分鐘，30分鐘。以找到zuì佳的消化時(shí)間。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。其余步驟和冰凍切片6-16步相同。
結(jié)果觀(guān)察：
ALDH1的細(xì)胞胞漿著色呈棕黃色。
注意事項(xiàng)：
由于特定的mRNA序列僅占總mRNA的少數(shù)，加上基因僅由四個(gè)堿基排列組合而成，因此原位雜交容易出現(xiàn)非特異性染色。通過(guò)不加探針和用陰性標(biāo)本做對(duì)照，基本可以確定染色是否為特異性的。有明顯的非特異性染色現(xiàn)象時(shí)，用預(yù)雜交液對(duì)含探針的雜交液進(jìn)行稀釋?zhuān)话阆♂?—10倍；并應(yīng)加強(qiáng)探針雜交后的洗滌。如果有少量的細(xì)胞核著色屬于正常情況；如果出現(xiàn)大量的細(xì)胞核著色，往往和標(biāo)本固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有關(guān)，應(yīng)重新處理標(biāo)本。

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