BTN100803 酸酚

酸酚是高品質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品,由北京百奧萊博供應(yīng),本產(chǎn)品用于科學(xué)研究,我公司專(zhuān)注于RNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng),為您提供的酸酚質(zhì)量可靠,批間差小,且價(jià)格公道,熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...
特別提示:包括酸酚在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱(chēng):酸酚
英文名稱(chēng):Acidic Phenol
產(chǎn)品貨號(hào):BTN100803
產(chǎn)品規(guī)格:100mL
本品是將重蒸餾用乙酸鈉酸性緩沖液充分飽和而得,pH在4-5之間,不會(huì)再吸收樣品的水分,可以直接用于RNA提取。
儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸和保存、避光。有效期一年。
疑難解答:
Q:離心后為何酚相在下面?
A:苯酚的比重是1.071,水飽和苯酚的比重更低,只比純水稍重。如果水溶液中有較高濃度的鹽和其他成分(細(xì)胞裂解后也會(huì)釋放出大量的如核酸,糖分等細(xì)胞成分),其比重很容易超過(guò)苯酚,在此情況下離心,苯酚將在下層,水相將在上層,取樣時(shí)需要十分小心。如果要使苯酚相在下層,可以使用比重更大的酚-lǜ仿-異戊醇混合液。
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試劑盒特點(diǎn):
1. 免酚和lǜ仿處理,操作安全可靠。
2. 簡(jiǎn)單快速,處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。
3. RNA 純度更高,平均 OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
4. 目前已測(cè)試過(guò)上百種植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。
6. 高于進(jìn)口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。
試劑盒組成:
| 成分 | 規(guī)格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 50ml |
| 離心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA 洗脫液 | 10ml |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸和保存,有效期一年。
使用方法:
1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物葉片、或50-100mg植物種子、或200-500mg植物果實(shí)。
2. 先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNAhold中的植物組織需用紙吸去RNAhold液體后再剪切成小塊),放入10-15mL塑料離心管中,加入1mL溶液A,然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫,但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織,硯磨完后加入1mL溶液A。注意:溶液A在4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀,使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織(比如果實(shí))含有大量水份,勻漿液會(huì)多于1mL,轉(zhuǎn)移時(shí)也只取1mL。
4.室溫12000~15000g離心3~5分鐘,管底沉淀為細(xì)胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。
6. 加入等體積的溶液B,充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對(duì)某些植物,屬于正常現(xiàn)象),千萬(wàn)不要去掉沉淀,一定要把所有的混合物上柱。
7. 將一半的溶液(如果有沉淀,則先混勻)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,13000-15000g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液(如果有沉淀,則先混勻)轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,13000-15000g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液,室溫離心半分鐘,棄穿透液。再加0.3mL 通用洗柱液,室溫離心半分鐘,棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可,但如果在第7 步加入溶液B后有沉淀產(chǎn)生,則需要洗三次,每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3mL。
10.室溫離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。
11. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free 收集管中,加入50-100μL RNA 洗脫液,室溫放置1-2分鐘。
12. 13000-15000g室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的電泳檢測(cè):如果需要做Northern雜交,強(qiáng)烈建議用戶(hù)使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳,因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
14. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定:將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL),進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
15. RNA 純度測(cè)定:無(wú)污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染,但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。
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