貝氏柯克斯體單重?zé)晒釶CR檢測試由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要貝氏柯克斯體單重?zé)晒釶CR檢測試等細(xì)菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括貝氏柯克斯體單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：貝氏柯克斯體單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA133
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

本試劑盒適合于檢測全血等樣本中的貝氏柯克斯體通用，用于貝氏柯克斯體通用感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。

本試劑盒用一對貝氏柯克斯體通用特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對貝氏柯克斯體通用的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

試劑盒組成：

組分	數(shù)量	規(guī)格
貝氏柯克斯體反應(yīng)液(qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
貝氏柯克斯體陽性對照(PTC)	1管	50μL/管

儲存條件：-20℃以下，有效期6個(gè)月。

使用方法：

一、樣品采集：
用注射器取血5mL至EDTA-2Na抗凝管，取抗凝血下層血細(xì)胞50μL，加入100μL雙蒸水吹勻。

二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
對上述處理好的樣本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL核酸提取液)，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

三、檢測步驟：
1．試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個(gè)反應(yīng)加入的量	N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液	14μL	N×14μL
酶混合物	1 μL	N×1μL
總量	15 μL	N×15μL

計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
2．qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

1循環(huán)

50℃ for 2 min預(yù)變性

1循環(huán)

95℃ for 10 minPCR擴(kuò)增

40循環(huán)

95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

四、結(jié)果分析：
1．結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
2．試驗(yàn)成立判定
?陰性對照：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
?陽性對照：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
?以上條件應(yīng)同時(shí)滿足 ，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
3．結(jié)果判定
?在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明貝氏柯克斯體核酸陽性。
?Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明貝氏柯克斯體核酸陰性。
?如果Ct值>35，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
?對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行貝氏柯克斯體 qPCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明貝氏柯克斯體核酸陽性；否則判為樣本陰性。

五、注意事項(xiàng)：
?初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
?所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
?PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
?樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行，以免污染。
?試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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貨號：SYA115
規(guī)格：48次/盒
本試劑盒適用于檢測頭部、乳腺、生殖器淋巴結(jié)、脾、懷孕后期或生產(chǎn)后早期的子宮、乳房組織、流產(chǎn)的胎兒組織、胎膜、陰道分泌物、精液、關(guān)節(jié)炎和水囊瘤液等樣本中的布氏桿菌(BS)，用于布氏桿菌(BS)感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

本試劑盒用一對布氏桿菌特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對布氏桿菌核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

試劑盒組成：

組份	數(shù)量	規(guī)格
布氏桿菌反應(yīng)液(BS-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
布氏桿菌陽性對照(BS-PTC)	1管	50μL/管

儲存條件：-20℃以下，有效期6個(gè)月。

使用方法：

一、樣品采集：死亡或撲殺動物，取頭部、乳腺、生殖器淋巴結(jié)、脾、懷孕后期或生產(chǎn)后早期的子宮、乳房組織、流產(chǎn)的胎兒組織、胎膜、陰道分泌物、精液、關(guān)節(jié)炎和水囊瘤液。

二、樣品處理：
?組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；
?陰道拭子樣品、精液、關(guān)節(jié)炎和水囊瘤液直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

三、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
對上述處理好的樣本加入40uL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

四、檢測步驟：
1．試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BS-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個(gè)反應(yīng)加入的量	N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液	14μL	N×14μL
酶液	1μL	N×1μL
總量	15μL	N×15μL

計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(BS-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
2．qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預(yù)變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

五、結(jié)果分析：
1．結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
2．試驗(yàn)成立判定
?陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
?陽性對照(BS-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
?以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
3．結(jié)果判定
?在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明BS核酸陽性。
?Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明BS核酸陰性。
?如果35＜Ct值，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
?對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行BS qPCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明BS核酸陽性；否則判為樣本陰性。

六、注意事項(xiàng)：
?初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
?所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
?PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
?樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進(jìn)行，以免污染。
?試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

關(guān)注貝氏柯克斯體單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒，貝氏柯克斯體單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒，SYA133，百奧萊博，，的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：


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