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價(jià)格：電議
所在地：福建 廈門(mén)市
型號(hào)：A4004M
更新時(shí)間：2024-09-23
瀏覽次數(shù)：907
公司地址：http://www.biwriter.com/
李經(jīng)理(先生)
產(chǎn)品組成
A4004S
A4004M
2×SYBR Green PCR Master Mix
1ml
5×1ml
儲(chǔ)存條件：
本產(chǎn)品-20℃保存有效期至少一年，4℃可保存3個(gè)月。解凍后應(yīng)充分混勻，避免產(chǎn)生大量氣泡。避光保存。-20°C保質(zhì)期兩年。2-8°C保質(zhì)期三個(gè)月。避免反復(fù)凍融。
試劑原理：
本產(chǎn)品利用熱啟動(dòng)酶HS Taq DNA polymerase 進(jìn)行 qPCR 擴(kuò)增反應(yīng)，通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物嵌合SYBR Green I 而激發(fā)的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)。
1、 PCR
PCR 法是以微量 DNA 進(jìn)行目的片段擴(kuò)增的方法。通過(guò) DNA 鏈的熱變性、引物退火、
DNA 聚合酶作用下引物的延伸三個(gè)步驟循環(huán)往復(fù)，可在短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增大量 DNA 片段。
2、 熒光檢出
SYBR Green I 是一種結(jié)合與小溝中的雙鏈 DNA 結(jié)合染料，與雙鏈 DNA 結(jié)合后，其熒光大大增強(qiáng)，大吸收波長(zhǎng)約為 497nm，發(fā)射波長(zhǎng)大約為 520nm。
SYBR Green I 可以與所有的雙鏈 DNA 相結(jié)合，無(wú)需使用探針，即可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，通用性好，且靈敏度很高。但是，由于 SYBR Green I 與所有的雙鏈 DNA 相結(jié)合，因此由引物二聚體、單鏈二級(jí)結(jié)構(gòu)以及錯(cuò)誤的擴(kuò)增產(chǎn)物引起的假陽(yáng)性會(huì)影響定量的性。在定量?jī)x器檢測(cè)過(guò)程中，可以通過(guò)測(cè)量升高溫度后熒光的變化，由解鏈曲線來(lái)分析產(chǎn)物的均一性，從而區(qū)分產(chǎn)物的溶解峰溫度而區(qū)分特異與非特異的產(chǎn)物。
使用方法：
反應(yīng)條件
1、 兩步法
熱啟動(dòng)：95℃ 10 分鐘；
變 性：95℃ 10～20 秒；
退火/延伸：60℃ 20～60 秒。
溶解曲線分析。
2、 三步法
熱啟動(dòng)：95℃ 10 分鐘；
變 性：95℃ 10～20 秒；
退 火 ：56-64℃ 10～30 秒
延 伸：72℃ 10～60 秒。溶解曲線分析。
對(duì)于 Roche LightCycler480，熱啟動(dòng)時(shí)間應(yīng)采用 10min，ABI7500 也可以采用 5min 熱啟動(dòng)。
qPCR反應(yīng)體系配制：
建議的模板量 10～100ng（基因組 DNA）或 1～10ng（cDNA 模板）。
試劑
20μl 體系
50μl 體系
終濃度
2×SYBR Green PCR Master Mix
10μl
25μl
1×
Primer 1（10μM）
0.4～2μl
1～5μl
0.2～1.0μM
Primer 2（10μM）
0.4～2μl
1～5μl
0.2～1.0μM
Template DNA
4μl
10μl
ddH2O
Total volume
20μl
50μl
比對(duì)qPCR試劑合的性能與特點(diǎn)
?
1.比對(duì)品牌qPCR試劑盒這個(gè)產(chǎn)品也供應(yīng)一些臨床診斷產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的企業(yè)，在GMP車(chē)間生產(chǎn)，質(zhì)控與性能更有保證；
2.比對(duì)品牌qPCR試劑盒使用熱啟動(dòng)酶，不是普通TAQ酶;
3.?性能不遜于進(jìn)口品牌的；
4.?可提供試用裝，比進(jìn)口很多，比國(guó)產(chǎn)的略貴點(diǎn)，不錯(cuò)的；
5.?已提供廈門(mén)大學(xué)、華僑大學(xué)及醫(yī)學(xué)院等科研機(jī)構(gòu)使用。
注意事項(xiàng)：
1、 SYBR Green PCR Master Mix 經(jīng)過(guò)特殊配制，采用熱啟動(dòng)酶，具有更高特異性；
2、 對(duì)于退火溫度較低的引物或超過(guò) 200bp 長(zhǎng)片段擴(kuò)增建議采用三步法；
3、 擴(kuò)增前后要使用專(zhuān)用的區(qū)域和移液器，戴手套操作并經(jīng)常更換，PCR 反應(yīng)完成后切勿打開(kāi)反應(yīng)管。以大限度減少 PCR 產(chǎn)物對(duì)樣品的污染。
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