DH5α Electrocompetent cell

大腸桿菌電轉感受態(tài)細胞

產(chǎn)品標簽：

DH5α Electrocompetent Cell 電擊感受態(tài)細胞；0；DH10B；XL1-Blue；1mm電轉杯（電擊杯）；Biorad 1652083；

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菌株描述

DH5α是實驗室常用的一種質(zhì)?？寺∮镁?，其φ80lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補，可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。特別適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復制。

DH5α菌株基因型：F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的電擊感受態(tài)細胞，只能用于DNA的電擊轉化，不能用于熱激轉化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率可達1×1010 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。

產(chǎn)品包裝

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態(tài)細胞好保存在-80℃以下，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。

2） 整個轉化操作，嚴格根據(jù)相應溫度及無菌條件要求進行。

3） 加入DNA的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。DNA不純或存在鹽、乙醇、蛋白及緩沖液等污染時，會導致轉化效率急劇下降。

4） 為確保高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。

5） 電擊感受態(tài)細胞加入電擊杯應避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。

6） 電擊杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和DNA的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風險。

7） 若轉化大質(zhì)?；蛳氆@得較高轉化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉化效率下降一個數(shù)量級。

8） 對于連接產(chǎn)物轉化：好在轉化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液重懸產(chǎn)物，保證DNA濃度不超過100ng/μl。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。

9） 混入質(zhì)粒時應輕柔操作，吸取感受態(tài)細胞時不可用孔徑過小的槍頭（普通200μl槍頭應剪去槍頭尖0.6cm）。避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃度的質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。

10） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）將0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實冰面，電杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。

2）取-80℃保存的電擊感受態(tài)細胞插入冰中5min，待其完全融化。加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），用手撥打管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。

【注意】：①若需要測定轉化效率，使用1μl對照質(zhì)粒pUC19（10 pg/μl）；②對于連接產(chǎn)物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE buffer（貨號：MS3537-500ML）重懸，DNA濃度不要超過100ng/μl，體積不超過5μl/50μl感受態(tài)。

3）用200μl槍頭將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。

4）啟動電轉儀，設置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=1800 V（此參數(shù)參考Bio-rad，具體使用請參考電轉儀推薦步驟來操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。

5）2min后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入700μl不含抗生素的無菌SOC培養(yǎng)基（室溫），用1ml槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉移到50ml離心管（比如：BD Falcon 50ml錐形離心管），向離心管中補加SOC培養(yǎng)基至5ml。37℃，225 rpm復蘇60min。

6) 5000rpm，1min離心收菌，重懸后取100-200μl涂布到含相應抗生素的SOC平板上（因菌量較大，若全部

涂板請選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個）。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)13-17h。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

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