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PCR操作時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)
PCR檢測(cè)微量感染因子時(shí)，容易因?yàn)槲廴镜亩鴮?dǎo)致各種問題，進(jìn)行PCR操作時(shí)，操作人員應(yīng)該嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程，zui大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜污染的出現(xiàn)。
（1）劃分操作區(qū)：普通PCR尚不能做到單人單管，實(shí)現(xiàn)完全閉管操作，但無論是否能夠達(dá)到單人單管，均要求實(shí)驗(yàn)操作在三個(gè)不同的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進(jìn)行：① 標(biāo)本處理區(qū)，包括擴(kuò)增摸板的制備；② PCR擴(kuò)增區(qū)，包括反應(yīng)液的配制和PCR擴(kuò)增；③ 產(chǎn)物分析區(qū)，凝膠電泳分析，產(chǎn)物拍照及重組克隆的制備。各工作區(qū)要有一定的隔離，操作器材專用，要有一定的方向性。如：標(biāo)本制備→PCR擴(kuò)增→產(chǎn)物分析→產(chǎn)物處理。切記：產(chǎn)物分析區(qū)的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個(gè)工作區(qū)。
（2）分裝試劑：PCR擴(kuò)增所需要的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的超凈工作臺(tái)或負(fù)壓工作臺(tái)配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中，不能用來吸取擴(kuò)增后的DNA和其他來源的DNA：① PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水；② 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)配制；③ 引物和dNTP應(yīng)分裝儲(chǔ)存，分裝時(shí)應(yīng)標(biāo)明時(shí)間，以備發(fā)生污染時(shí)查找原因。
(3) 實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng) 盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽(yáng)性反應(yīng)的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真，在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意：① 戴一次性手套，若不小心濺上反應(yīng)液，立即更換手套；② 使用一次性吸頭，嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；③ 避免反應(yīng)液飛濺，打開反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；④ 操作多份樣品時(shí)，制備反應(yīng)混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應(yīng)的度；⑤ 后加入反應(yīng)模板，加入后蓋緊反應(yīng)管；⑥ 操作時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照，即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性；⑦ 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染，使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該專用，不能交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū)；⑧ 重復(fù)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證結(jié)果，慎下結(jié)論。
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產(chǎn)品列表
人TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒
DL-beta-Phenylalanine DL-beta-苯丙氨酸 [614-19-7] 25g
(+) Abscisic acid 脫落酸 [21293-29-8] 500mg
ABTS, diammonium salt 2,2-連氮基-雙-(3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽 [30931-67-0] 1g
ABTS, diammonium salt 2,2-連氮基-雙-(3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽 [30931-67-0] 5g
ABTS, liquid substrate ABTS 溶液 / 100ml
ABTS, 140mg substrate tablets 片劑 （140 mg/片） / 10T
Ethidium bromide 溴化乙錠 [1239-45-8] 25g
ABTS, 140mg substrate tablets 片劑 （140 mg/片） / 50T
ACES N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸 [7365-82-4] 25g
ACES N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸 [7365-82-4] 100g
Albumin, bovine, fraction V, heat shock isolation pH 7.0 牛血清白蛋白 [9048-46-8] 25g
Barium sulfide 硫化鋇 [21109-95-5] 500g
NZ-Amine A / 100g
Bromelain 菠蘿蛋白酶 [9001-00-7] 5g
Bromelain 菠蘿蛋白酶 [9001-00-7] 25g
Chloroauric acid, hydrate 氯金酸四水 [27988-77-8] 500mg
dGTP 2’-Deoxyguanosine-5'-triphosphate, trisodium salt 2’-脫氧鳥苷5’-三磷酸–三鈉鹽 [93919-41-6] 50mg
GDP disodium salt hydrate;Guanosine-5’-monophosphate, disodium salt hydrate 5’-單磷酸鳥苷二鈉鹽 [5550-12-9] 25g
10-Hydroxycamptothecin (S)-10-羥基喜樹堿 [19685-09-7] 1g
1-Octacosanol 二十八烷醇 [557-61-9] 25g
Silicon (IV) oxide 二氧化硅 [14808-60-7] 1kg
Riboflavin 核黃素 [83-88-5] 25g
Riboflavin 核黃素 [83-88-5] 100g
Riboflavin 核黃素 [83-88-5] 500g
Riboflavin 核黃素 [83-88-5] 25g
Riboflavin 核黃素 [83-88-5] 100g
Riboflavin 核黃素 [83-88-5] 500g
RNase A, 核糖核酸酶A [9001-99-4] 25mg
RNase A, 核糖核酸酶A [9001-99-4] 100mg
RNase A, 核糖核酸酶A [9001-99-4] 500mg
NZ-Amine A / 500g
phi29 DNA Polymerase phi29 DNA 聚合酶 / 100U
phi29 DNA Polymerase phi29 DNA 聚合酶 / 250U
phi29 DNA Polymerase phi29 DNA 聚合酶 / 1000U
phi29 DNA Polymerase phi29 DNA 聚合酶 / 5000U
DNA polymeraser I DNA聚合酶I / 500U
DNA polymeraser I DNA聚合酶I / 2500U
Klenow fragment (DNA polymerase I Large fragment) Klenow 片段（DNA 聚合酶I大片段） / 300U
Klenow fragment (DNA polymerase I Large fragment) Klenow 片段（DNA 聚合酶I大片段） / 1500U
Klenow fragment (DNA polymerase I Large fragment) Klenow 片段（DNA 聚合酶I大片段） / LC3000U
Klenow fragment Klenow 片段 / 300U
Klenow fragment Klenow 片段 / 1500U
T4 DNA polymerase T4 DNA 聚合酶 / 100U
T4 DNA polymerase T4 DNA 聚合酶 / 500U
T7 DNA polymerase T7 DNA 聚合酶 / 300U
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase 末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶 / 500U
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase 末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶 / 1500U

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