果膠酶檢測試劑盒(DNS比色法)
保質期:：6個月有效；4℃運輸，4℃保存。
產品簡介:
天然果膠類物質以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實、根、莖、葉中，是細胞壁的一種組成成分，它們伴隨纖維素而存在，構成相鄰細胞中間層粘結物，使植物組織細胞緊緊黏結在一起。果膠酶(Pectinase)是一類分解果膠質酶類的總稱，實質是多聚半乳糖醛酸水解酶，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于植物果實和微生物中，主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。
果膠酶(PG)檢測試劑盒(DNS比色法)檢測原理是果膠酶水解果膠生成β-半乳糖醛酸，與二硝基水楊酸(DNS)反應形成有色化合物，該化合物呈色強度與半乳糖醛酸濃度成正比，于分光光度計540nm處測定吸光度，通過與標準曲線比較計算出樣品中果膠酶活性，主要用于定量檢測植物組織或果實中果膠酶，反應顏色越深，吸光度越大，果膠酶的活性越強，該50T試劑盒可以檢測約23~24次樣本。
該試盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、蒸餾水
2、實驗材料：桃子、李子、蘋果、杏等果實或其他植物組織
3、研缽或勻漿器
4、離心管或試管
5、離心機
6、水浴鍋
7、比色杯
8、分光光度計
操作步驟(僅供參考):
果膠酶提?。喝」麑嵒蚱渌参锝M織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品3g，置于提前4℃預冷的研缽或勻漿器，加入3ml4℃預冷的PectinaseLysisBuffer，充分研磨或勻漿后轉入離心管或試管，4℃10000g離心10min，留取上清液，即為果膠酶提取液，
4℃保存待用。稀釋半乳糖醛酸標準液：取適量的半乳糖醛酸標準(1mg/ml)，按下表進行稀釋：
加入物(ml) 1 2 3 4 5
半乳糖醛酸標準(1mg/ml) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
蒸餾水 0.49 0.48 0.47 0.46 0.45
半乳糖醛酸含量(μg) 10 20 30 40 50
PG加樣：按照下表設置空白管、標準管、對照管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡，小心混勻。如果樣品中的果膠酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測好能設置2平行管，求平均值。
加入物(ml) 空白管 標準管 對照管 測定管
蒸餾水 0.25 - - -
半乳糖醛酸標準(1~5號管) - 0.25 - -
果膠酶提取液 - - 0.25(提前煮沸5min) 0.25
Pectinase Lysis Buffer 0.75 0.75 0.5 0.5
Pectinase Assay Buffer 0.25 0.25
37℃水浴1h。
DNS顯色液 0.75 0.75 0.75 0.75
PG測定：立即沸水浴5min，自來水中將離心管或試管冷卻至室溫，以蒸餾水稀釋至12.5ml，混勻，比色杯光徑1cm，以空白調零，以分光光度計立即系列標準管、對照管、測定管在540nm處吸光度。
計算：
以1~5號管系列半乳糖醛酸標準(10、20、30、40、50μg)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標繪制標準曲線，直接計算直線回歸方程。以測定管吸光度減去對照管吸光度的差值作為測定吸光度值(A測定)，帶入回歸方程求得的測定管果膠酶含量，根據下述公式計算其活性：
組織樣品的果膠酶活性(μg/h.g)={m×V}/(W×t×VS)
式中：m=根據標準曲線求得的測定管果膠酶含量(μg)
V=果膠酶提取液總體積(ml)
W=樣品鮮重(g)
t=37℃水浴時間(h)=1
Vs=測定時所取果膠酶提取液的體積(ml)=0.5
液體樣品的果膠酶活性(μg/h·ml)=m×N/V
式中：m=根據標準曲線求得的測定管果膠酶含量(μg)
N=稀釋倍數
V=測定時所取果膠酶提取液的體積(ml)=0.5
注意事項：
1、取樣量、試劑用量應根據果膠含量適當調整。
2、可溶性糖對測定結果有較大影響，應徹di去除樣品中的可溶性糖。
3、PectinaseLysisBuffer應密閉保存，避免有效成分揮發(fā)。
4、37℃水浴1h后，應立即加入DNS顯色液。
5、如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標儀測定，但應考慮酶標儀的大檢測體積。
6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
