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堿性磷酸酶-PAS聯(lián)合染色液操作步驟

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  • 更新日期:2021-09-07 15:17
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詳細(xì)介紹
中文名稱:堿性磷酸酶-PAS聯(lián)合染色液
規(guī)格:6×50ml
分類:酶類染色
儲(chǔ)存方式:4℃,避光,6個(gè)月
用途:堿性磷酸酶染色與過(guò)碘酸雪夫試劑合用,同時(shí)顯色堿性磷酸酶和PAS陽(yáng)性物質(zhì)。
注意事項(xiàng):適用于冰凍切片、石蠟切片,堿性磷酸酶活性部位呈黑色,PAS陽(yáng)性物質(zhì)呈紫紅色。染色過(guò)程中注意控制過(guò)碘酸處理的時(shí)間,否則容易褪色。

簡(jiǎn)介:堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡(jiǎn)稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi),其活性所需適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮。ALP-PAS聯(lián)合染色液不僅能夠顯示堿性磷酸酶活性位點(diǎn)和糖原等物質(zhì),亦能區(qū)分二者。冰凍切片及石蠟切片均可。

操作步驟:
1、石蠟切片脫蠟至蒸餾水,冰凍切片直接入水。
2、冰凍切片在丙酮-等量混合液內(nèi)4℃固定。
3、切片入ALP孵育液(陰性對(duì)照切片入ALP對(duì)照液),置于37℃溫箱。
4、入硝酸鈷溶液,置于37℃溫箱染色5min。流水洗5min后入蒸餾水。
5、上述過(guò)程中配制ALP硫化工作液,即取試劑(C)用蒸餾水稀釋50倍,即為ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液孵育。
6、流水洗10min后入蒸餾水。
7、入高碘酸溶液,室溫氧化。蒸餾水換洗3次。
8、入Schiff試劑,置于37℃溫箱染色。
9、按亞硫酸溶液:蒸餾水=3:1的比例配制亞硫酸工作液,清洗3次,每次2min,入蒸餾水。
10、冰凍切片直接用甘油明膠封片,石蠟切片脫水。常規(guī)透明,中性樹(shù)膠封片。

染色結(jié)果:
堿性磷酸酶活性部位   黑色
PAS陽(yáng)性物質(zhì)   紫紅色

注意事項(xiàng):
1、本染色液適用于冰凍切片、石蠟切片。染色過(guò)程中注意控制高碘酸處理的時(shí)間,否則容易褪色。
2、堿性磷酸酶顯色后,經(jīng)高碘酸應(yīng)特別小心,嚴(yán)格控制時(shí)間,否則褪色。
3、ALP孵育液、ALP硫化液易失效,好分成小分儲(chǔ)存,一經(jīng)開(kāi)啟立即使用。
4、ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味,應(yīng)小心操作。
5、對(duì)冰凍切片染色時(shí),應(yīng)減少切片在室溫暴露的時(shí)間。
 
 
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