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普魯士藍(lán)染色液(核固紅法)使用說明書

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  • 更新日期:2021-08-09 15:08
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詳細(xì)介紹
中文名稱:普魯士藍(lán)染色液(核固紅法)
產(chǎn)品規(guī)格:2×50mL|2×100mL
用途:組織三價(jià)鐵染色,含鐵血黃素染色
注意事項(xiàng):又稱Perls染色液,或者柏林藍(lán)反應(yīng)。染色結(jié)果為:三價(jià)鐵或含鐵血黃素呈藍(lán)色,其他呈紅色。推薦采用該法作為含鐵血黃素的主要染色法。
儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月

產(chǎn)品概述:
含鐵血黃素(Hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素,為金黃色或棕黃色顆粒,因其含鐵,且為金黃色,故稱為含鐵血黃素。當(dāng)紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬后,在溶酶體酶的作用下,血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。Perls普魯士藍(lán)反應(yīng)(Prussian blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經(jīng)過亞鐵qing化鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍(lán)色,常見于吞噬細(xì)胞或間質(zhì)內(nèi),其染色原理在于亞鐵qing化鉀溶液使三價(jià)鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸分離出來,三價(jià)鐵與亞鐵qing化鉀反應(yīng),生成一種不溶解的藍(lán)色化合物即三價(jià)鐵的亞鐵qing化物。 普魯士藍(lán)染色用于顯示局部組織內(nèi)的各種出血性病變,常見于吞噬細(xì)胞內(nèi),可以很好地區(qū)分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長期保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣,可以進(jìn)行復(fù)染。該染色液的復(fù)染液采用核固紅,是jing典、常用的復(fù)染液。

使用方法:
(一)石蠟切片染色:
1、組織固定于10%中性福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。
2、切片厚度4μm,常規(guī)脫蠟至水。
3、蒸餾水水洗1min。
4、切片入Perls stain(見注意事項(xiàng)2),浸染15~30min。
5、蒸餾水充分沖洗2~5min。
6、入核固紅染色液,淡染細(xì)胞核5~10min。
7、自來水沖洗1~5s。
8、常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固
(二)冰凍切片染色:
1、無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗2~3min。
2、染色、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,時(shí)間可以相應(yīng)縮短。
(三)細(xì)胞染色:
1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自來水沖洗2次,每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次,每次2min。
4、染色、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,但操作時(shí)間應(yīng)相應(yīng)延長。

染色結(jié)果:
含鐵血黃素或三價(jià)鐵 藍(lán)色
細(xì)胞核、其他組織 紅色

陰性對(duì)照:取相同切片脫蠟至水。入5%草酸孵育2~6h,經(jīng)Perls stain,其余步驟同上。結(jié)果為陰性。

注意事項(xiàng):
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林,經(jīng)普通福爾馬林長期固定后,組織會(huì)有損傷。避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會(huì)妨礙鐵的保存。
2、整個(gè)操作過程中容器要干凈,避免用金屬鐵制品,洗切片和容器時(shí)以蒸餾水為宜,因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。Perls stain染色時(shí),應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時(shí)間。
3、所有切片都應(yīng)使用同一個(gè)陽性對(duì)照切片,選擇適合的對(duì)照非常重要。尸檢肺組織是一個(gè)很好的對(duì)照,包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞)。
4、冰凍切片和細(xì)胞染色,好根據(jù)具體情況摸索實(shí)驗(yàn)條件。
 
 
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