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改良Harris蘇木素染色液注意事項(xiàng)

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  • 更新日期:2021-06-28 15:14
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詳細(xì)介紹
中文名稱:改良Harris蘇木素染色液
規(guī)格:100ml|500ml
用途:屬于常規(guī)切片HE染色的明礬蘇木素的一種,適用于細(xì)胞核染色,尤其適用于臨床紙片染色。
注意事項(xiàng):Harris蘇木素染色中l(wèi)eagene推薦采用該試劑。細(xì)胞核染色的選擇性和保存時(shí)間優(yōu)于Harris蘇木素染色液,對(duì)細(xì)胞核染色較深,染色一般5-8分鐘,存儲(chǔ)太久后,使用時(shí)應(yīng)過濾。
儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月

簡介:蘇木素為堿性天然染料,可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。

操作步驟(僅供參考):
(一)石蠟切片染色
1、切片脫蠟至水
①二甲苯作用2次,每次5~10min。
②(可選)無水乙醇作用2次,每次3~5min。
③95%的乙醇3~5min
④90%的乙醇3~5min
⑤80%的乙醇3~5min
⑥自來水或蒸餾水沖洗1~3min

2、染色
①改良Harris蘇木素染色液5~8min
②自來水或蒸餾水沖洗5~10s
③(可選)1%鹽酸乙醇分化2~5s
④自來水沖洗20~30s
⑤(可選)弱堿性水返藍(lán)20~40s
⑥自來水沖洗30~60s
⑦伊紅染色3~5min
⑧自來水沖洗1~5s

3、脫水、透明、封固
①80%乙醇10~20s
②90%乙醇10~20s
③95%乙醇作用2次,每次1~2min。
④無水乙醇作用2次,每次2~3min。
⑤二甲苯透明3次,每次2~3min。
⑥中性樹脂封片。
染色結(jié)果:細(xì)胞核呈藍(lán)色;細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色;角蛋白、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色。

(二)冰凍切片染色
1、乙mi-乙醇混合固定液5~10s
2、自來水沖洗2~5s
3、改良蘇木素染色液滴染1~2min(可加熱至50℃)。
4、自來水沖洗2~5s
5、(可選)1%的鹽酸乙醇分化液2~5s
6、自來水沖洗2~5s
7、(可選)弱堿性水返藍(lán)2~5s
8、自來水沖洗5~10s
9、伊紅染色液染色2~5s
10、水洗1~2s
11、80%的乙醇1~2s
12、95%的乙醇1~2s
13、無水乙醇2~5s
14、苯酚二甲苯(1:3)2~5s
15、二甲苯透明3次,每次2~5s。
16、中性樹脂封片
染色結(jié)果:細(xì)胞核呈藍(lán)色;細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。

(三) 細(xì)胞染色
1、4%的多聚甲醛固定 10~20min。
2、自來水沖洗 2 次, 每次 2min。
3、蒸餾水沖洗 2 次, 每次 2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,作用時(shí)間應(yīng)相應(yīng)縮短。
染色結(jié)果:細(xì)胞核呈藍(lán)色;細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。

注意事項(xiàng):
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
2、乙醇應(yīng)經(jīng)常換新液。
3、鹽酸乙醇分化液的分化時(shí)間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、組織的類別和鹽酸乙醇分化液的新舊而定,另外分化后自來水沖洗時(shí)間應(yīng)該足夠,以便徹底清洗酸。
4、乙mi-乙醇混合固定液是由乙mi和 95%乙醇等量混合而得,再加入適量乙酸,密閉保存。
5、冷凍切片染色時(shí)間盡量要短。
6、促藍(lán)液常使用 0.2~1%氨水水溶液或 Scoot 促藍(lán)液或 0.1~1%碳酸鋰水溶液。
7、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 
 
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