柱式DNA膠回收試劑盒說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品編號(hào)：BTN60202

規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本試劑盒用于從瓊脂糖凝膠中或DNA反應(yīng)體系中(如PCR反應(yīng))回收DNA片段。試劑盒采用可以、專(zhuān)一結(jié)合DNA的硅膠膜和獨(dú)特的溶膠體系，或DNA反應(yīng)體系中回收的DNA片段，回收效率可達(dá)50-90%（跟片段大小相關(guān)）。

1. ，回收效率zui高可達(dá)90%（跟片段大小和膠濃度等因素有關(guān)）。

2. 快速，整個(gè)過(guò)程只需要十余分鐘。

3. 回收DNA的范圍為50bp－40Kb（但效率各不相同）。

4. 純度高，本試劑盒回收的DNA可直接用于酶切、連接、PCR登等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

5. 用途廣，本試劑盒能回收單鏈、雙鏈及環(huán)狀DNA。

6. 儲(chǔ)存方便，試劑盒可以在室溫放置數(shù)月，不影響其質(zhì)量。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫運(yùn)輸及保存，有效期為一年。

使用方法：

1. 對(duì)膠回收：切取含DNA片段的瓊脂糖凝膠（100 mg左右，盡可能多地把多余的膠切除，否則會(huì)影響回收效率），放入一干凈的1.5 mL塑料離心管（自備）中，用移液槍頭搗碎，按重量比為1：3到1：5的比例加入通用溶膠液(100mg瓊脂糖凝膠需要加入300μL-500μL通用溶膠液)。

PCR回收：直接在PCR反應(yīng)管中加3-5倍體積的通用溶膠液，混勻，然后跳過(guò)第2步、直接從第3步做起。如果PCR反應(yīng)中使用了石蠟，需要預(yù)先去除。

2. 50℃保溫使膠完全溶化（一般需要5分鐘），其間可以振蕩數(shù)次以促進(jìn)瓊脂糖凝膠的溶化。如果片段長(zhǎng)度在300bp以下，建議不要加熱，以免DNA變性，影響回收率。

3. 將離心管中的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套上液體收集管，靜置3分鐘。

注意：靜置有助于DNA與離心吸附柱的硅膠膜結(jié)合。若一次加不完，可分兩次加入并離心。

4. 12000-15000g離心1分鐘，倒掉收集管中的液體。

5. 加入0.7-0.8 mL通用洗柱液于離心柱中，室溫靜置2分鐘。

6. 12000-15000 g離心1分鐘，倒棄收集管中的廢液。

7. 12000-15000 g離心半分鐘以去除離心柱中的殘留液體。

8. 將離心柱置于一新的干凈的塑料離心管（自備）中，加入30-100 μL DNA洗脫液2.0于離心吸附柱硅膠膜的中央，靜置3分鐘。

9. 12000-15000 g離心1分鐘。

10. 離心管底部所得溶液即為純化的DNA溶液，可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或者放-20℃長(zhǎng)期保存。

注意事項(xiàng)：

1. 電泳回收DNA時(shí)，電泳緩沖液可以為T(mén)AE、TBE或者DNA/RNA兩用快速電泳液SuperBuffer-2?；厥招Ч麨镾uperBuffer-2zui好，TAE次之，TBEzui差。詳細(xì)見(jiàn)SuperBuffer-2產(chǎn)品介紹。

2. 通用洗柱液含有容易揮發(fā)物質(zhì)，使用后一定要擰緊瓶蓋，密閉保存。

3. 瓊脂糖凝膠體積的大小與回收率成反比關(guān)系，即體積越大，越不利于回收，一次膠回收以使用100 mg瓊脂糖凝膠為宜。

4. 如果在五分鐘內(nèi)凝膠溶化不完全，可以適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)水浴時(shí)間以使膠充分溶化，否則DNA包裹在瓊脂糖凝膠中，影響DNA的回收效率。

5. 膠溶化后的液體轉(zhuǎn)移到離心柱后，可以延長(zhǎng)靜置時(shí)間使DNA與膜充分結(jié)合，提高回收效率。

6. 洗脫DNA前的空甩很重要，其目的是去除膜上殘留酒精，否則殘留酒精會(huì)影響后續(xù)DNA反應(yīng)。

7. 增大DNA洗脫液2.0使用量有利于回收，但要注意實(shí)際上樣量與zui終回收體積的關(guān)系，以便于計(jì)算回收率。DNA洗脫液2.0可以用TE或水替代，但回收率稍有降低。