DNA粘轉(zhuǎn)平試劑盒說明書

產(chǎn)品編號：BTN60107

規(guī)格：20T

產(chǎn)品及特點：

本產(chǎn)品利用Pfu DNA polymerase所具有3’到5’的聚合酶活性和5’到3’外切酶活性，將3’和/或5’突出的DNA 片段轉(zhuǎn)化成平末端, 用于克隆工作。

1. 簡單，精心優(yōu)化過的2×Polishing Buffer 中含有所需要的所有成分，不需要單獨準備。

2. 適用于任何平末端的DNA 載體。

格及成分：

保存條件：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。

自備試劑：

DNA片段。

使用方法：

1. DNA 片段的準備：

無論是來源Taq, Tth,T7, Klenow 和Vent等DNA聚合酶合成的DNA片段，還是用限制性內(nèi)切酶制備的DNA 片段，粘轉(zhuǎn)平之前均需要將DNA 沉淀以便去除反應(yīng)液中的無關(guān)成份。沉淀DNA 的方法包括經(jīng)典的鹽/純沉淀法，離心柱DNA 吸附法和百奧萊博的一管式非醇超快DNA 沉淀法。

2. 設(shè)置粘轉(zhuǎn)平（Polishing）反應(yīng)：

在一個干凈的離心管中，分別加入

3’或5’突出的DNA 片段         10-500 ng

2×Polishing Buffer             25 μL

Pfu DNA polymerase              1 μL

補水到                          50 μL

72℃保溫2小時。

注意：如果不使用熱蓋式PCR 儀器加熱，則需要在反應(yīng)管中再加入適量液體石蠟以防反應(yīng)過程中水份蒸發(fā)。

3. 反應(yīng)后處理

粘轉(zhuǎn)平反應(yīng)后，樣品可以放-20℃長期保存，也可以直接用于T4 DNA連接酶催化的連接反應(yīng)。對10μL的連接反應(yīng)體系，一般需要加入1-2μL粘轉(zhuǎn)平反應(yīng)液。由于Pfu DNA polymerase在連接反應(yīng)的溫度條件下幾乎沒有活性，所以不必去除。但文獻報道，去除后連接效率更高。