加T試劑盒說明書

產(chǎn)品編號：BTN60106

規(guī)格：50T

產(chǎn)品及特點：

本產(chǎn)品利用Taq DNA polymerase 的不依賴于模板的末端轉(zhuǎn)移酶活性，在只有dTTP 存在的情況下，在平末端的DNA 片段加上一個dT尾巴，主要用于制備T載體。

1. 簡單, 2X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要單獨準(zhǔn)備。

2. 適用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA成本polymerase 等酶合成的DNA片段。

3. 加T 后的載體可以作為T 載體使用。

格及成分：

保存條件：

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑：

平末端DNA片段、平末端質(zhì)粒DNA。

使用方法：

一：反應(yīng)前純化處理：

平末端DNA 片段或平末端質(zhì)粒DNA 可以采取膠回收和酚/氯fang抽提法等常規(guī)方法純化，zui后溶解在水或TE 中，終濃度以0.1μg/μL 為宜。必須注意的是, 用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有3 到5 外切活性的DNA 聚合酶擴增得到的DNA 片段，必須經(jīng)過徹底的去除殘留的酶的處理過程（如酚/氯fang抽提或Proteinase K 處理），否則它們將在加T 反應(yīng)時，切除掉加上的T 尾巴，干擾反應(yīng)。

二：加T 反應(yīng)

在干凈的0.5 mL 或1.5 mL 離心管中，分別加入下列成分：

回收的DNA片段                          0.2-2μg

2×dT Tailing Buffer                    25μL

Taq DNA polymerase（5 U/μL）           1μL

補水到                                  50μL

72℃保溫2 小時

三：反應(yīng)后處理

加T 反應(yīng)后，Taq DNA polymerase將與DNA末端緊密結(jié)合，所以必須酚/氯fang抽提去除。如果使用Proteinase K處理后再用酚/氯fang抽提效果會更好。得到的DNA溶于適量水和TE中后即可用于后續(xù)連接反應(yīng)。