超快核酸電泳液干粉說明書

產(chǎn)品編號：BTN51210

規(guī)格：20L/50L

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

SuperBuffer-2 是百奧萊博在SuperBuffer 基礎(chǔ)上開發(fā)的DNA/RNA 兩用快速電泳液。它跟SuperBuffer 一樣，能以高達(dá)30 V/cm 的電壓電泳，達(dá)到快速電泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是，本產(chǎn)品對鹽離子濃度敏感度低，同時(shí)還能用于RNA 電泳。其主要優(yōu)點(diǎn)是:

1. 快速，電泳時(shí)間短, 對分辨率要求不高的電泳（如PCR 和酶切檢測等）甚至可以在5-10 分鐘內(nèi)完成。

2. 不影響后續(xù)的Southern 雜交，DNA 膠回收和DNA 連接等反應(yīng)。

3. 價(jià)格與TBE(干粉)相當(dāng)甚至更。

4. DNA 膠回收率高于使用TAE 和TBE 電泳的膠回收。

規(guī)格及成分：

保存條件：

常溫保存和運(yùn)輸，有效期兩年。

自備試劑：

蒸餾水。

使用方法：

一：溶液的配制

將本產(chǎn)品全部加到一個(gè)干凈的容量適當(dāng)?shù)娜萜髦?，按下表的用量加入蒸餾水并在室溫下用磁力攪拌器攪拌，直到干粉完全溶解(一般需要30 分鐘左右)。

注：其他濃度的濃縮液配制可以按比例計(jì)算，但濃縮液濃度不能超過20×，否則干粉不能全部溶解。由于干粉含多種未徹底混合均勻的成份，所以必須一次性全部用于溶液的配制。如果緩沖液(濃縮液或工作液)長時(shí)間不用，zui好滅菌后放4℃長期保存。

二: DNA 電泳

將SuperBuffer-2 濃縮液用蒸餾水稀釋到1×，除了需要使用較高電壓才能得到快速的電泳結(jié)果外，操作跟使用TAE 和TBE 基本一樣。需注意的地方是：

1. 電壓：在SuperBuffer-2 溶液中既可以使用常規(guī)電壓，也可以使用較高電壓，只是使用常規(guī)電壓時(shí)，其快速的優(yōu)越性就體現(xiàn)不出來。使用較高電壓時(shí)，由于各電泳槽結(jié)構(gòu)不同，zui佳電壓需要稍做摸索。一次zui好將工作電壓調(diào)到zui高電壓的80%左右，即平均25 V/cm（電距離）。對一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10 分鐘；對大的電泳槽，可用400-450V 跑5-10 分鐘。每次根據(jù)電泳結(jié)果和緩沖液溫度決定各電泳槽的zui佳工作電壓和時(shí)間。一般電壓越高，電泳時(shí)間越短。若在電泳時(shí)發(fā)生電流或電壓逐漸下降的現(xiàn)象，請檢查電泳儀是否設(shè)置了電流上限或功率上限。緩沖液電泳次數(shù)超過3 次或緩沖液中有細(xì)菌/真菌生長也會出現(xiàn)此現(xiàn)象，需要更換新的緩沖液。

2. 膠濃度：建議將瓊脂糖凝膠的濃度控制在0.8%左右，對于長度在100 bp 以下的DNA 片段，可以將瓊脂糖凝膠的濃度提高到1.2%左右。由于每次溶膠過程中會丟失水份，所以zui好在溶膠后適當(dāng)補(bǔ)充水份（可以前后稱重），否則膠濃度會逐漸增加，DNA 的移動速度會減低、產(chǎn)熱會增加。使用0.8%左右的瓊脂糖凝膠的好處是一方面可以節(jié)約膠的用量，另一方面可以使DNA的泳動速度更快，同時(shí)還能夠提高DNA 的回收率。

3. 染色：如果使用EB，zui好把染料加入到融化后的凝膠中（只是EB 的終濃度zui好為0.4 -0.5μg/mL，比使用TAE 和TBE 時(shí)稍高），但也可以加入到電泳緩沖液中或/和電泳上樣液中。如果使用百奧萊博低毒染料綠如藍(lán)，zui好將染料加入到融化后的凝膠中。如果只有膠中有染料，則長時(shí)間電泳后（超過20 分鐘），大部分染料在高壓下會與DNA 分離，DNA 條帶可能會看不見或看起來很淡，此時(shí)應(yīng)該再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl（終濃度≥0.05 mol/L）能提高染色效果。SuperBuffer-2 與SYBR Green I 也有良好的兼容性，可以結(jié)合使用。

4. DNA 條帶扭曲：DNA 樣品中所含SDS 量過高時(shí)（SDS 主要來于上樣液）， DNA條帶將出現(xiàn)扭曲，影響實(shí)驗(yàn)效果。建議使用不含SDS 的上樣液。

5. 反復(fù)使用：1×SuperBuffer-2 電泳液至少可以重復(fù)使用2-3 次，如果使用大電泳槽，可以重復(fù)使用的次數(shù)會更多。

6. TAE 和TBE 膠：已經(jīng)用TAE 和TBE 電泳液配置好的瓊脂糖凝膠可以直接放入1× SuperBuffer-2 電泳液中按上述電泳條件電泳，但有時(shí)候會有扭曲現(xiàn)象。

三：RNA 電泳

跟DNA 電泳一樣，必須在使用前用水將SuperBuffer-2 溶液稀釋到1×，其使用方法跟DNA 電泳的主要區(qū)別是：

1. 電壓：RNA 電泳時(shí)，zui高使用電壓大約只有DNA zui高使用電壓的一半左右，所以一般minigel 可以使用150 V 左右的電壓。由于各實(shí)驗(yàn)室電泳槽規(guī)格各異，一次電泳時(shí)，zui好將工作電壓調(diào)到跟MOPS 電泳一樣的電壓，每次再逐漸往上調(diào)電壓和時(shí)間，根據(jù)電泳結(jié)果和測定緩沖液的溫度決定今后的工作電壓。

2. RNA 上樣液：RNA 必須與含變性劑的RNA 上樣液混合，并在80℃保溫10 分鐘后冰浴2-5 分鐘再上樣。不能直接將RNA 樣品上樣或使用DNA 上樣液，否則電泳不但很難得到清晰的條帶，并且在加樣孔中還會有看似DNA 污染的條帶出現(xiàn)。推薦使用百奧萊博生產(chǎn)的RNA 變性/上樣/染色三合一即用型溶液RNAON。

3. 膠濃度：RNA 電泳zui好使用1%-1.5%的瓊脂糖凝膠，用1X SuperBuffer-2配制。

4. 染色：同DNA 電泳。