1.取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。

2.分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)

品組（6 個(gè)濃度）、空白孔、待測樣品組。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只，依次編好號(hào)碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul 加入

一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第三只

試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第五只試管中，充分

混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后各管濃度分別是：

800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L,50ng/L ,0ng/L。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

3.加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中先加樣

品 40ul 然后再加生物素標(biāo)記的抗 IFN-γ 抗體 10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

4.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

6.加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入 50ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

7.溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。

8.洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5 次，用吸水紙徹底拍干。

9.顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。

10.終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。

11.讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。

 人磷酸絲氨酸性磷酸酶(PSPH)檢測試劑盒注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的 30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。