人真皮成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)制備方式

  真皮成纖維細(xì)胞屬于由中胚層分化而來(lái)的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來(lái)源于人正常的皮膚組織，真皮成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞，由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng)，它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。

  一般而言，成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和III型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。傷口修復(fù)時(shí)，真皮成纖維細(xì)胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質(zhì)的表型，同時(shí)，它們會(huì)分泌大量的透明質(zhì)酸來(lái)應(yīng)對(duì)修復(fù)時(shí)的炎癥反應(yīng)。

  以下是提供的一種人真皮成纖維細(xì)胞的制備方式(僅供參考)：

  1.首先在分離真皮成纖維細(xì)胞時(shí)要做到在無(wú)菌條件下進(jìn)行，打開(kāi)生物安全柜紫外燈30min作無(wú)菌處理。

  2.將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精，消毒2min，

  3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍，

  4.然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等，

  5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊，放入dish中，加0.1%的dispase溶液，封口膜封口，4℃冰箱過(guò)夜消化，

  6.第二天，用鑷子將表皮與真皮分開(kāi)(薄的那層是表皮，厚的那層是真皮)，

  7.將真皮剪碎，移至離心管，用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定)，

  8.用100 μm網(wǎng)篩過(guò)濾，

  9.取濾液，300 g，離心5 min，

  10.用完全培養(yǎng)基重懸沉淀，

  11.鋪瓶，

  12.隔天換液。

  以上是皮膚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)的一種方式，不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同，使用的試劑比例也不盡相同，皮膚成纖維細(xì)胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達(dá)檢測(cè)，采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)。細(xì)胞純度可高達(dá)于90%，所有的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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