素爾生物所售ATCC原代細(xì)胞均為原裝進(jìn)口的凍存（cryopreserved）細(xì)胞，全程干冰運(yùn)輸。客戶收到細(xì)胞后，應(yīng)立即轉(zhuǎn)移到液氮罐中儲(chǔ)存。如果客戶手頭暫無(wú)液氮罐，應(yīng)立即將細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)。嚴(yán)禁將細(xì)胞凍存在-80℃，因?yàn)?80℃將會(huì)給細(xì)胞造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷。

步. 仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

因不同品牌、不同種屬、不同類型的細(xì)胞其培養(yǎng)技巧存在些許差別，客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀隨貨附贈(zèng)的說(shuō)明書(shū)，切記不可僅憑經(jīng)驗(yàn)操作。

通常，我們可以從說(shuō)明書(shū)中獲取以下重要信息：

（1）細(xì)胞數(shù)目

（2）細(xì)胞增殖能力

（3）推薦培養(yǎng)基、培養(yǎng)器皿及包被材料（Coating Solution）

（4）推薦接種密度

（5）復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代等操作步驟

（6）運(yùn)輸及儲(chǔ)存條件

第二步. 細(xì)胞復(fù)蘇及原代培養(yǎng)

細(xì)胞復(fù)蘇是關(guān)系后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵步驟。不同品牌、不同種屬的凍存原代細(xì)胞在復(fù)蘇時(shí)可能有所不同，請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1. 選擇合適的培養(yǎng)器皿，使用coating solution（poly-L-lysine、Fibronectin等，see the datasheet for specific details）進(jìn)行包被，并置于37℃, 5% CO2/95% air培養(yǎng)箱中平衡過(guò)夜（至少1小時(shí)）。

2. 小心將裝有細(xì)胞的凍存管從液氮罐取出，注意保護(hù)手和眼睛。

3. 將凍存管的蓋子擰松1/4圈，等待10秒，釋放蓋子內(nèi)可能殘留的液氮，然后重新旋緊蓋子。

4. 將凍存管置于37℃水浴鍋內(nèi)（注意不要把凍存管完全浸沒(méi)在水中），輕搖凍存管直至內(nèi)容物幾乎完全溶解（只剩一些非常小的冰晶殘留在管內(nèi)）。此過(guò)程大約需要1-2分鐘。

注：水浴融化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)給細(xì)胞帶來(lái)?yè)p傷，導(dǎo)致不貼壁。

5. 迅速將凍存管自水浴鍋中取出擦干，用70%酒精擦拭凍存管外表面，然后轉(zhuǎn)移至超凈臺(tái)內(nèi)。

6. 在超凈臺(tái)內(nèi)擰開(kāi)凍存管的蓋子，小心手指不要碰到管口，用1ml移液槍輕輕吹打重懸內(nèi)容物，然后加入10倍以上內(nèi)容物體積的培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液。

注：復(fù)蘇后的內(nèi)容物含有凍存液DMSO殘留，不同品牌對(duì)待是否有必要離心去除DMSO殘留這一問(wèn)題意見(jiàn)不一，請(qǐng)務(wù)必嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

某些品牌，例如Sciencell、Cell Applications等明確規(guī)定，不允許將細(xì)胞離心以去除DMSO殘留。因?yàn)殡x心過(guò)程尤其是高速離心，給細(xì)胞造成的危害遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于DMSO殘留給細(xì)胞造成的影響。通常，按照說(shuō)明書(shū)上推薦的培養(yǎng)基用量將內(nèi)容物進(jìn)行稀釋后，DMSO濃度已經(jīng)降到很低，不會(huì)給細(xì)胞造成損傷。

而有些品牌例如ATCC，推薦客戶使用125g離心力離心10分鐘，棄上清，以去除DMSO殘留，然后用1或2ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

7. 按照說(shuō)明書(shū)推薦接種密度將細(xì)胞懸液分別加入到若干個(gè)事先包被過(guò)的培養(yǎng)器皿內(nèi)。

注：大多數(shù)原代細(xì)胞培養(yǎng)起始接種密度介于103-104 cells/cm2。對(duì)于某些增殖速率較高的細(xì)胞類型，通常以較低的接種濃度起始培養(yǎng)。詳細(xì)接種密度請(qǐng)參照說(shuō)明書(shū)。

8. 輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞懸液均勻分散開(kāi)來(lái)。

9. 將培養(yǎng)器皿置于37℃, 5% CO2/95% air培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

注：大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞系的佳生長(zhǎng)溫度是37℃，少數(shù)對(duì)溫度敏感的動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞及兩棲類動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)需要相對(duì)低一點(diǎn)的溫度（例如28℃）。雖然體外培養(yǎng)的細(xì)胞能夠承受生存環(huán)境溫度驟降，甚至大多數(shù)細(xì)胞在4℃仍能存活數(shù)天，但是少有細(xì)胞能夠在高于適宜生長(zhǎng)溫度2℃的環(huán)境下存活幾個(gè)小時(shí)。

10. 6-16小時(shí)后，次更換培養(yǎng)液，目的是為了去除殘留的DMSO以及未貼壁的死細(xì)胞。

11. 之后，視細(xì)胞生長(zhǎng)情況，每隔2-3天換一次液，詳見(jiàn)datasheet。