ELISA試劑盒細胞培養(yǎng)清處理方法

  一般情況下，物理方法如反復(fù)凍融，勻漿等方法會比化學(xué)方法好，因為化學(xué)方法會引入酸或堿，可能會對ELISA試劑盒實驗產(chǎn)生影響。我們也做了相關(guān)實驗來評測化學(xué)提取液和洗滌劑對ELISA試劑盒檢測的影響，如 RIPA、TritonX-100、NP-40和SDS、脫氧膽酸鈉、β巰基乙醇、DTT 和尿素。根據(jù)我們的質(zhì)檢結(jié)果，高濃度的洗滌劑會影響ELISA檢測的終結(jié)果。然而，其效果會洗滌劑濃度的降低而減少。與其他化學(xué)裂解緩沖液相比，1%的 Triton X-100 和 1%NP-40 對 ELISA檢測的影響較小。如果一定要用化學(xué)提取方法的話，推薦用這兩種洗滌劑來提取靶蛋白。利用化學(xué)的細胞裂解液裂解細胞，如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測效果，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

  如果目的物是分泌型，主要在胞外，即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本，如果目的物主要存在于胞內(nèi)，則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。取細胞培養(yǎng)上清，1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。

  細胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本。 ELISA試劑盒需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多， 如細胞狀態(tài)、 細胞數(shù)量(大于 10^6)、ph(約為 7)、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

  細胞裂解液：

  (1)貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集) ;

  (2)將收集到的細胞用冷PBS 洗3次;

  (3)物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞，再反復(fù)凍融) ：

  ? 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂;

  ? 反復(fù)凍融：將待破碎的細胞在-20 度以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細胞溶脹破碎;

  (4)將標本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

  ELISA試劑盒處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程，由于蛋白容易變性，降解，故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過 1 個月，-80度不應(yīng)超過2個月。在標本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒