實驗原理：酶聯(lián)免疫吸附實驗的原理以及常用方法

  酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)是目前臨床實驗室檢測免疫學指標受歡迎、應用范圍廣泛的方法之一，廣泛應用于乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病以及結(jié)核等傳染類疾病的診斷及激素的檢測，具有靈敏度高、特異性強、快速簡便、重復性好、成本低、環(huán)保且適合大批量人群篩查等優(yōu)點。

  什么是酶聯(lián)免疫吸附試驗

  酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是一種特殊的試劑分析方法，在免疫酶技術的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術，其試劑易于保存、結(jié)果判斷較為客觀，是目前實驗室檢測抗原抗體經(jīng)濟、普遍的試驗診斷方法。

  酶聯(lián)免疫吸附試驗原理

  ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結(jié)合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

  酶聯(lián)免疫吸附試驗常用方法

  1.直接法(direct ELISA)

  將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標記的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。

  優(yōu)勢：操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可避免交互反應。

  缺點：試驗中的一抗都得用酶標記，但不是每種抗體都適合做標記，費用相對提高。

  2.間接法(indirect ELISA)

  此測定方法與直接法類似，差別在于一級抗體沒有酶標記，改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

  優(yōu)勢：二抗可以加強信號，而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它多的免疫反應性。

  缺點：交互反應發(fā)生的機率較高。

  3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)

  被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其中一個抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量;或不標記，再透過酶標記的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取，才可避免交互反應或競爭相同的抗原結(jié)合部位。

  優(yōu)勢：高靈敏、高專一性，抗原無須事先純化。

  缺點：抗原一定得擁有兩個以上的抗體結(jié)合部位。

  4.競爭法(competitive ELISA)

  樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體，當樣品里的自由抗原越多，就可以結(jié)合越多的抗體，而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清洗步驟，洗去自由抗原和抗體的復合物，只留下固定抗原和抗體的復合物，拿來與只有固定抗原的對照組結(jié)果相比較，根據(jù)呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。

  優(yōu)勢：可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

  缺點：整體的敏感性和專一性都較差。

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