古朵闡述：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方

  實驗方法原理

  牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用zui廣泛和zui普通的細菌基礎培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細菌生長繁殖所需要的zui基本的營養(yǎng)物質，所以可供作微生物生長繁殖之用?；A培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、 磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCI提供無機鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要加人一定量瓊脂作凝固劑，瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，實際應用時，一般在沸水浴中或下面墊以石棉網煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質量和氣溫的不同而有所不同。

  由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此要用稀酸或稀堿將其pH調至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。

  牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是我司常見代理產品，我司代理BD品牌培養(yǎng)基多年，一直以的質量贏得客戶的信賴與支持。本章上海恒遠將為您具體解析牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方：

  牛肉膏：3.0 g

  蛋白胨：10.0 g

  NaCI：5.0 g

  水：1 000 ml

  pH：7.4-7.6

  試劑、試劑盒

  牛肉膏蛋白胨NaCI水瓊脂氫氧化鈉鹽酸

  儀器、耗材

  試管三角瓶燒杯量筒玻璃棒培養(yǎng)基分裝器天平牛角匙高壓蒸氣滅菌鍋pH試紙棉花牛皮紙記號筆麻繩紗布?

  實驗步驟

  一、稱量

  按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放人燒杯中，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒人燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放人水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。

  蛋白胨很易吸濕，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品。瓶蓋也不要蓋錯。

  二、溶化

  在上述燒杯中先加人少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網上加熱使其溶解，或在磁力攪拌器上加熱溶解(圖1)將藥品*溶解后，補充水到所需的總體積，如果配制固體培養(yǎng)基時，將稱好的瓊脂放人已溶的藥品中，再加熱溶化，zui后補足所損失的水分，在制備用三角瓶盛固體培養(yǎng)基時，一般也可先將一定量的液體培養(yǎng)基分裝于三角瓶中，然后按1.5%-2.0%的量將瓊脂直接分別加人各三角瓶中，不必加熱溶化，而是滅菌和加熱溶化同步進行，節(jié)省時間。

  在瓊脂溶化過程中，應控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養(yǎng)基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養(yǎng)基中，影響細菌生長。

  三、調pH

  在未調pH前，先用楂密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加 人1 mol/L NaOH邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH，直至pH達7.6。反之，用lmol/L HCl進行調節(jié)。

  對于有些要求pH較的微生物，其pH的調節(jié)可用酸度計進行(使用方法可參考有關說明書)。

  pH不要調過頭，以避免回調而影響培養(yǎng)基內各離子的濃度。配制pH低的瓊脂培養(yǎng)基時，若預先調好pH并在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分來滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調整pH。

  四、過濾

  趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利某些實驗結果的觀察，一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去(本實驗勿需過濾)。

  五、分裝

  1. 按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝人試管內或三角燒瓶內。分裝裝置見圖2。

  培養(yǎng)基分裝裝置

  A. 漏斗分裝裝置;B. 自動分裝器

  1. 鐵架;2. 漏斗;3. 乳膠管;4. 彈簧夾;5. 玻管;6. 流速調節(jié);7. 裝量調節(jié);8. 開關

  2. 液體分裝

  分裝高度以試管髙度的1/4左右為宜。分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定，一般以不超過三角瓶容積的一半為宜，如果是用于振蕩培養(yǎng)用，則根據(jù)通氣量的要求酌情減少;有的液體培養(yǎng)基在滅菌后，要補加一定量的其他無菌成分，如抗生素等，則裝量一定要準確。

  3. 固體分裝

  分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面。分裝三角燒瓶的量不超過三角燒瓶容積的一半為宜。

  4. 半固體分裝

  試管一般以試管髙度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。

  分裝過程中，注意不要使培養(yǎng)甚沾在管(瓶)上，以免沾污棉塞而引起污染。

  六、加塞

  培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞及試管帽等)，以阻止外界微生物進人培養(yǎng)基內而造成污染，并保證有良好的通氣性能。

  七、包扎

  加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞， 其外再用一道麻繩扎好，用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制曰期(有條件的實驗室，可用市售的鋁箔代替牛皮紙，省去用繩扎，而且。)

  八、滅菌

  將上述培養(yǎng)基以0.103 MPa，121℃，20 min高壓蒸氣滅菌。

  九、擱置斜面

  將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜(圖3)。

  十、無菌檢查

  將滅菌培養(yǎng)基放人37 ℃的溫室中培養(yǎng)24-48 h，以檢査滅菌是否*。

  培養(yǎng)基上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。