支原體污染檢測(cè)方法

一般根據(jù)支原體種類不同，采取不同的方法進(jìn)行檢測(cè)。目前常用的檢測(cè)方法有：

1. 試劑盒檢測(cè)法：

目前已有專門做支原體檢測(cè)的試劑盒，可以用細(xì)胞滴片進(jìn)行檢測(cè)。

2. 觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)特征：

支原體污染比較嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)生長(zhǎng)減慢，有的培養(yǎng)基pH明顯變酸，并出現(xiàn)細(xì)胞病變，以此可依次對(duì)支原體污染進(jìn)行檢測(cè)，但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能準(zhǔn)-確診斷。

3. 分離培養(yǎng)法：

大多數(shù)支原體可出現(xiàn)特有的典型菌落。因而可依次盡心檢測(cè)，該方法準(zhǔn)-確、可-靠，但時(shí)間長(zhǎng)，敏感性不夠高。

4. DNA結(jié)合熒光素染色法：

利用熒光染劑（bisbenzimide,Hoechst 33258）偵測(cè)支原體污染。熒光染料會(huì)結(jié)合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區(qū)域，因?yàn)橹гwDNA中A-T含量占多數(shù)（55～80%），所以可將其染色而偵測(cè)。被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后，在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點(diǎn)，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。

5. 電子顯微鏡和免疫電子顯微鏡法：電子顯微鏡或者免疫電鏡下對(duì)樣本進(jìn)行觀察，此法較準(zhǔn)-確，但受條件限制，時(shí)間長(zhǎng)，敏感性不高。

6. 間接免疫熒光法和免疫印跡：簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)。

未污染的細(xì)胞、支原體污染細(xì)胞、電鏡檢測(cè)

支原體污染預(yù)防及處理

組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中，可以從以下幾方面來(lái)預(yù)防支原體的污染：

控制環(huán)境污染；嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作；細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保-證無(wú)菌；在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。

當(dāng)細(xì)胞被支原體污染后若由于材料的特殊性必須保留可以采用一定的抗生素進(jìn)行處理，對(duì)支原體蕞有抑制活性抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等。目前，市場(chǎng)上已有了新一代支原體抗生素M-Plasmocin，能有-效的殺滅支原體，又不影響細(xì)胞本身的代謝，而且處理過(guò)的細(xì)胞不會(huì)重新感染支原體。另外，配合支原體檢測(cè)試劑盒可以幫助盡快發(fā)現(xiàn)支原體的污染。

支原體污染后果

細(xì)胞株若受到細(xì)菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時(shí)，會(huì)嚴(yán)重的影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。而細(xì)菌、真菌等之微生物污染時(shí)，較易自培養(yǎng)基等的外觀變化察覺(jué)。但是若受到支原體之污染時(shí)，細(xì)胞之外觀較無(wú)明顯變化，但是其污染會(huì)造成細(xì)胞之生長(zhǎng)速率緩慢、細(xì)胞產(chǎn)生病變之型態(tài)改變等等變化