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重組細(xì)胞因子的要求有哪些?

發(fā)布時間:2021-06-03瀏覽次數(shù):1122返回列表

  細(xì)胞因子(cytokine,CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等多種功能。細(xì)胞因子可被分為白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長因子等。

  下面重組細(xì)胞因子要求:

  1. 真實性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析;必要時應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測其真實性。

  2. 純度:應(yīng)用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產(chǎn)品純度。

  3. 生物活性:進(jìn)行相應(yīng)的體外(in vitro)或體內(nèi)(in vivo)活性檢測。

  4. 蛋白含量:通過紫外光譜分析,SDS-PAGE電泳檢測;必要時應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。

  5. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測內(nèi)毒素。

  6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。

  重組細(xì)胞因子的狀態(tài):

  市場上主流的重組蛋白產(chǎn)品,多在不含載體蛋白或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等)的條件下,以低鹽的形式做凍干處理,因此微量(多以微克計量)的細(xì)胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層,所以建議在收到試劑后,務(wù)必于開蓋前先離心20-30秒,使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于凍干館的底部(此時能否見到白色沉淀均屬正?,F(xiàn)象)

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