對(duì)于大部分科研人員來(lái)說(shuō)，研究中一般用到均是現(xiàn)成的細(xì)胞系/株，我們只需要：進(jìn)行細(xì)胞傳代和保種。然而，這些細(xì)胞系常常由于體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，而丟失原有生物學(xué)特性，對(duì)藥物處理的反應(yīng)差距越來(lái)越大。因此，原代細(xì)胞的地位日漸凸顯，Paper中若有了原代細(xì)胞的數(shù)據(jù)都會(huì)添色不少。然而，就小編親生經(jīng)歷，原代細(xì)胞分離著實(shí)是個(gè)技術(shù)活，今天我們就結(jié)合自身經(jīng)驗(yàn)，為大家介紹：腫瘤組織和正常組織的原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法。

一部分：原代細(xì)胞的基本知識(shí)

1. 什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)?

       原代細(xì)胞（Primary cells）：是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。這里的組織主要指：組織器官、外周血及胚胎等。

      原代細(xì)胞培養(yǎng)：由于原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng)（一般10代以內(nèi)）。所以一般認(rèn)為：培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

2. 原代細(xì)胞與細(xì)胞系（cell lines）的區(qū)別

原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較：

原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較

3. 原代細(xì)胞的應(yīng)用

由于原代細(xì)胞生物學(xué)特性未發(fā)生很大改變，Z接近和反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，因此是：

(1) 研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的工具；

(2)更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)療的腫瘤診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。

第二部分：原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)技術(shù)

原代培養(yǎng)的原理

      將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng)。主要包括取材——分離——培養(yǎng)等3部分；

在原代細(xì)胞應(yīng)用較多的包括：組織器官（如實(shí)體瘤、皮膚等）、懸浮細(xì)胞的取材等。

下面依次介紹：

一、腫瘤組織的取材

病人自體的原代腫瘤細(xì)胞由于更接近臨床患者標(biāo)本，可以更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)療的腫瘤診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。所以對(duì)病人自體腫瘤細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)十分必要。

基本過(guò)程如下圖所示：

原代腫瘤細(xì)胞的分離步驟

備注：上圖細(xì)胞為肉瘤患者的原代細(xì)胞

具體步驟如下：

1. 在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無(wú)菌PBS清洗3-5次；切成約1mm³組織塊；

2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；

3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；

4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來(lái)定，約1-2h；

5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí)，用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞，收集；

6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。