皮質(zhì)醇ELISA試劑盒測(cè)定原理：現(xiàn)在elisa試劑盒除非是測(cè)定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法，此種方法大多數(shù)用的是增強(qiáng)的雙抗體夾心法，即使用生物素-親和素系統(tǒng)，還有少數(shù)的指標(biāo)可能使用競(jìng)爭(zhēng)法，這類方法適用于半抗原的測(cè)定。
皮質(zhì)醇ELISA試劑盒具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個(gè)抗體必須用單抗，否則背景很高。當(dāng)然如果兩個(gè)都是單抗(這兩個(gè)單抗針對(duì)不同表位)，那么測(cè)定的線性范圍就較寬，試劑盒性能就較好；一個(gè)用單抗，一個(gè)用多抗，測(cè)定的靈敏度會(huì)較高。
某些簡(jiǎn)單的化合物用皮質(zhì)醇ELISA試劑盒測(cè)定時(shí)，因?yàn)闆]有兩個(gè)或以上的表位，一般只能作為半抗原，只能用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定。如果你發(fā)現(xiàn)有測(cè)定簡(jiǎn)單化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用雙抗體夾心法作測(cè)定原理時(shí)，這個(gè)試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。
一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測(cè)定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應(yīng)”(hookeHect)，也就是我們?cè)诿庖叱恋碓囼?yàn)中所稱的“帶現(xiàn)象”(zonephenomenon)。所以當(dāng)使用一步雙抗體夾心法時(shí)，樣品濃度太高，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)測(cè)不出來的現(xiàn)象，此時(shí)要作適當(dāng)?shù)南♂尣拍軠?zhǔn)確測(cè)定。
試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測(cè)定的方法時(shí)，試劑盒的組成一般包括：已包被單抗的酶標(biāo)板：一塊，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有鋁箔袋密封，打開后有干燥劑，實(shí)驗(yàn)時(shí)暫未使用的酶標(biāo)條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。
皮質(zhì)醇ELISA試劑盒的保質(zhì)期一般都是在一年，如果保存得當(dāng)?shù)脑?，不?huì)出現(xiàn)問題的。但不要反復(fù)凍融。當(dāng)然如果是正常的DAS-ELISA檢測(cè)試劑盒等，應(yīng)該放在4℃左右冰箱保存。建議elisa試劑盒解凍后一次用完。已開封或者使用后，剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，ELISA檢測(cè)試劑盒開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。
但要注意的是，如果將elisa試劑盒剛從冰箱里面拿出來就立即使用的話，可能會(huì)影響，其直接的后果是對(duì)一些弱陽性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。
建議：先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在ELISA檢測(cè)試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測(cè)定要求。
那么皮質(zhì)醇ELISA試劑盒的板子什么情況下會(huì)失效？
1．通常商品化的酶標(biāo)板要求密閉4℃保存，長(zhǎng)時(shí)間暴露或未密閉保存，要么失效，要么結(jié)果為非可靠數(shù)據(jù)；如果是自己包的板，可能效期更短，保存條件要求更高，至于顯色劑，正常條件下一天內(nèi)不會(huì)失效的。
2．第三板是否完全按照前兩板加所有試劑，如果缺失其中某一步驟，結(jié)果也會(huì)無色。