北京百奧萊博供應(yīng)的大孔樹脂NKA-9用于科學(xué)研究，我公司的大孔樹脂NKA-9品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括大孔樹脂NKA-9在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：大孔樹脂NKA-9
產(chǎn)品貨號(hào)：Y15017
產(chǎn)品規(guī)格：250g

儲(chǔ)存條件：RT
外觀：顆粒

根據(jù)您的關(guān)注的大孔樹脂NKA-9，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：

貨號(hào)	名稱	規(guī)格
QN3989	CM-葡聚糖凝膠C-25	25g|100g
QN4053	蛋白A瓊脂糖凝膠親和層析介質(zhì)	2ml
QN4058	DEAE葡聚糖凝膠A-50	25g
Y13323	葡聚糖凝膠G-75	25g
Y13364	葡聚糖T10	10g|500g
Y13377	淋巴細(xì)胞分離液	200ml
Y14497	硅膠	500g

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名稱：聚酰胺(30～60目)
貨號(hào)：QN3994
規(guī)格：500g

名稱：谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠4FF
貨號(hào)：QN4066
規(guī)格：10ml
pGEX載體表達(dá)的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進(jìn)行純化。GSTs是一類以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對(duì)底物的親和力是亞毫摩爾級(jí)的，因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹脂對(duì)GST及其融合蛋白的純化效率很高?？梢杂煤坞x谷胱甘肽的緩沖液洗脫結(jié)合GST融合蛋白。樹脂用3mol/L NaCl的緩沖液再生。谷胱甘肽瓊脂糖對(duì)GST融合蛋白的結(jié)合能力很強(qiáng)（每毫升柱床體積的樹脂能結(jié)合8毫克融合蛋白）。

技術(shù)參數(shù)：
粒度：45～165μm
流速：75cm/h
工作PH：pH4.0～10.0
耐壓：0.3Mpa
載量：＞10mg谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶

使用說明：
一、谷胱甘肽樹脂的處理：
1．輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器，將樹脂混成勻漿。
2．取部分勻漿放入15mL聚丙烯管（每100mL細(xì)菌培養(yǎng)物大約需要2mL勻漿）。
3．4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
4．在樹脂中加入10倍柱床體積預(yù)冷的PBS，顛倒數(shù)次混勻，4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
5．每毫升樹脂加入1毫升冷的PBS，制成50%勻漿，顛倒數(shù)次，混合均勻，懸液冰上放置待用。
二、制備細(xì)胞抽提物：
6．每100毫升培養(yǎng)物的細(xì)胞沉淀重懸于4mL PBS緩沖液中。
7．加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
8．用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強(qiáng)行注入黏稠的細(xì)胞裂解物中，劇烈振動(dòng)數(shù)次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5μg/mL,4℃振動(dòng)溫育10分鐘，4℃ 3000g離心30分鐘，去除不溶性細(xì)胞碎片，上清轉(zhuǎn)移到一只新管中，加入DTT至終濃度1mmol/L。
三、純化融合蛋白：
9．細(xì)胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和，每100毫升細(xì)菌培養(yǎng)物加2mL樹脂，于室溫輕搖30min。
10．混合物于4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
11．沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS，顛倒離心管數(shù)次混勻，洗去未與樹脂結(jié)合的蛋白。
12．4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
13．重復(fù)步驟11和12兩次。
14．結(jié)合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫，也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割，釋放靶蛋白。
四、用谷胱甘肽洗脫融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動(dòng)10min，洗脫樹脂上結(jié)合的蛋白。
16．4℃以500g離心5分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移至新管中。
17．重復(fù)步驟a和b兩次，合并3次上清。蛋白酶解從結(jié)合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在結(jié)合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子（根據(jù)融合蛋白中的位點(diǎn)選擇），每mL樹脂加入50單位溶于1mL PBS的蛋白酶。顛倒離心管數(shù)次混勻，室溫下振蕩2～16小時(shí)。用小規(guī)模實(shí)驗(yàn)確定時(shí)間。
19．4℃以500g離心5分鐘，上清小心移至新管中。（GST仍結(jié)合在樹脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
20．10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質(zhì)組成。
  試劑配制：
  谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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