超低分子量蛋白Marker I是高品質(zhì)的蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應，本產(chǎn)品用于科研試驗，超低分子量蛋白Marker I是我司眾多優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)研究之一，質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括超低分子量蛋白Marker I(3.3～22KD)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：超低分子量蛋白Marker I(3.3～22KD)
英文名稱：μltra Low Molecμlar Weight Protein Marker I
產(chǎn)品貨號：RFT045
產(chǎn)品規(guī)格：10T(100μl)

本產(chǎn)品包含3種多肽和2種低分子量蛋白質(zhì)組成，分子量范圍為3.3kD-22kD。可以用來判斷 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。




儲存條件：-20℃。

根據(jù)您的關注的超低分子量蛋白Marker I(3.3～22KD)，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：12mL親和層析柱
貨號：BTN140651
規(guī)格：12mL
本產(chǎn)品適用范圍廣泛，可用于純化分離重組蛋白、抗體和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA結合蛋白等生物大分子；還可以用于去除生物樣品中的內(nèi)毒素等污染。

親和層析是利用生物分子間所具有的專一親和力而發(fā)明的純化技術。它是利用生物分子間存在的特異性相互作用(如抗原－抗體、酶－底物或抑制劑、激素－受體等)，通過將具有親和力的兩個分子中的一個固定在不溶性基質(zhì)上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進行分離純化。

親和層析柱常見的使用方法有重力法、手動加壓法、蠕動泵法，其示意圖如下：


儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

常用親和標簽及純化方案：


名稱：一站式GST標記蛋白質(zhì)微量純化套裝
貨號：BTN111116A
規(guī)格：20次
重組蛋白N端的GST谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶能提高重組蛋白的水溶性，所以常用于蛋白質(zhì)重組表達。GST-谷胱甘肽親和層析是利用GST 標記的蛋白能與谷胱甘肽層析介質(zhì)結合，并能被還原型谷胱甘肽洗脫的特點而建立，是目前分離純化GST 標記蛋白質(zhì)的重要方法。本產(chǎn)品就是專門用于上述目的，其原理如下：


產(chǎn)品特點：
1．一站式套裝，含所需的谷胱甘肽介質(zhì)、溶液和層析柱，用戶只需要提供表達GST 標記蛋白的細菌(酵母、桿狀病毒、培養(yǎng)細胞)即可，非常方便。
2．專一性強，一次過柱即可獲得純度高達95%的GST-標記蛋白。
3．只能在非變性條件下使用，只可用于純化沒形成包涵體的GST 標記蛋白。
4．每次可以處理20mL的表達菌液，適合初步篩選和鑒定。
5．提供4mL濃度為50%的谷胱甘肽-Agarose 介質(zhì)，可吸附5-10mg GST 標記蛋白質(zhì)。
6．本介質(zhì)可以反復使用多次。

試劑盒組成：

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介質(zhì),50%	4ml	4ml
10×PBS緩沖液	100ml	100ml
溶液A	1ml	無
GST洗脫緩沖液成分一	25ml	25ml
GST洗脫緩沖液成分二	約80mg	約80mg
溶菌酶(20KU/mg)	無	30mg
Benzonase(2U/μL)	無	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL層析柱(帶篩板)	1套	1套
說明書	1份	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低溫運輸。收到貨后，介質(zhì)需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的樣品zuì好都留存少量作為SDS-PAGE分析的對照，在下面描述中就不再提醒。
2．本實驗需要用到的1×PBS緩沖液可用自備的超純水稀釋本試劑盒提供的10×PBS緩沖液而得。PBS緩沖液用超純水稀釋后其容易長細菌，注意防止污染。
3．GST 洗脫液的配制方法是將約80mg GST 洗脫液成分二干粉全部加入到GST 洗脫液成分一溶液中，搖晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脫液，分裝成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重組蛋白的表達和細菌收集
1．37℃振蕩培養(yǎng)20mL含表達質(zhì)粒的細菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到終濃度為0.1mM，30℃振蕩培養(yǎng)3小時或22℃振蕩培養(yǎng)8小時(或過夜)。
3．4℃ 5000g離心10分鐘收集20mL表達菌液，棄上清。
4．用1×PBS緩沖液重懸細菌沉淀，4℃ 5000g離心10分鐘，棄上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、細胞裂解
5．如果用本產(chǎn)品A型，用1mL冰浴的新鮮配制的細胞裂解液(1mL 1×PBS緩沖液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重懸細菌沉淀，冰上超聲裂解菌體直到在顯微鏡下看見大多數(shù)細胞破裂。超聲參數(shù)需根據(jù)儀器型號自行摸索，一般選1K-10K 頻率處理15次，每次20秒，間隔1分鐘(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否則會堵塞層析柱。
6．如果用本產(chǎn)品B型，在1mL冰浴的新鮮配制的細胞裂解液(在20mL 1×PBS緩沖液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分裝成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重懸細菌沉淀后冰上放置30分鐘，得到細菌裂解物。
7．將超聲或酶法細胞裂解物在13000 g 4℃離心10分鐘去除未裂解細胞和裂解細胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 標記蛋白。

三、層析柱的制備和GST蛋白純化
8．搖晃將谷胱甘肽-Agarose 介質(zhì)充分混勻后，取適量加入到預放了一片篩板的層析柱中(介質(zhì)用量需要根據(jù)GST蛋白產(chǎn)量決定，100mL菌液一般使用200μL介質(zhì)即可)。下列步驟各溶液的用量均針對200μL介質(zhì)而定，如果介質(zhì)用量不同，各溶液用量需相應調(diào)整。
9．用5mL預冷的1×PBS緩沖液洗柱。
10．將第7 步得到的上清液(含可溶性GST標記蛋白)上柱，讓重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE電泳。GST和谷胱甘肽之間的結合很緩慢，所以流速一定不能快，否則結合不充分。流速一般在0.2-1mL/分鐘即可。如要提高GST 標記蛋白與介質(zhì)的結合效率，可用本試劑盒提供的紅蓋將層析柱下的漏液口堵上，讓細菌裂解液和介質(zhì)在4℃結合30分鐘或過夜。也可以將穿透液反復上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS緩沖液洗柱，收集并保存穿透液(含雜蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脫液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 標記蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后續(xù)處理(如濃度測定或SDS-PAGE電泳)或-80℃長期放置。
13．對收集的2種穿透液和洗脫液進行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不預先脫鹽，則只能用Bradford法或OD 檢測法(1 OD280 約等于0.5mg/mL蛋白)測定穿透液和洗脫液的蛋白濃度。由于GST的分子量為26 KD，所以在SDS-PAGE膠上，GST 標記蛋白將比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢復(本試劑盒不含所需試劑)
1．用3倍體積的6M鹽酸胍處理柱子10分鐘。
2．用3倍體積的超純水處理柱子10分鐘。
3．用3倍體積的緩沖液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)處理柱子10分鐘。
4．用3倍體積的緩沖液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)處理柱子10分鐘。
5．再重復3-4 步兩次。
6．用3倍體積的超純水處理柱子3次。
7．用3倍體積的1×PBS緩沖液處理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍體積的1×PBS緩沖液待用。若長時間不用，則第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

關注超低分子量蛋白Marker I(3.3～22KD)，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：

貨號	名稱	規(guī)格
BTN130526	細菌專用蛋白酶抑制劑	1mL
WE0279	Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒	50次
WE0303	顯影粉	20套
RFT197	蛋白酶抑制劑混合物(真菌或酵母蛋白提取用)	1ml|5×1ml
KFS034	多聚賴氨酸溶液0.1%(Poly L-Lysine)	10ml(免疫組化用)
KFS053	Cy3標記抗小鼠免疫熒光染色試劑盒	300T
SY0401	MBP標簽蛋白高度交聯(lián)純化樹脂	5ml|25ml

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