酵母蛋白裂解液是高品質的蛋白質研究產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應，本產(chǎn)品用于科學研究，本品質量穩(wěn)定，價位合理，需要酵母蛋白裂解液等蛋白質研究產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括酵母蛋白裂解液在內，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：酵母蛋白裂解液
產(chǎn)品貨號：HR0279
產(chǎn)品規(guī)格：25ml|50ml|100ml

酵母蛋白裂解液用于對酵母的裂解。酵母裂解液已含常用蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。

儲存條件：室溫保存。
有效期：一年。

注意事項：
1．實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。
2．整個過程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。

使用方法：
1．取10ml酵母培養(yǎng)物，在4℃，10000g條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集酵母。
2．加入100μl冷的裂解液，混勻后，在4℃條件下振蕩5分鐘。
3．加入1μl試劑B，混勻后，在4℃條件下振蕩25-40分鐘。
4．在 4℃，1000g條件下離心5分鐘。
5．快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。
上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br />
根據(jù)您的關注的酵母蛋白裂解液，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：L-谷胱甘肽(還原型)
貨號：BTN120705
規(guī)格：5g
還原型谷胱甘肽是人類細胞質中自然合成的一種肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成，含有巰基(－SH)，廣泛分布于機體各器官內，作為一種抗氧化劑，可以保護肝臟細胞膜，增強肝臟的解毒能力，為維持細胞生物功能呈有重要作用。本產(chǎn)品可用于配制純化GST標簽蛋白的洗脫液。



儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期兩年。

名稱：包涵體大量純化試劑盒
貨號：BTN90510
規(guī)格：2次
本產(chǎn)品是包涵體微量純化試劑盒的大提升級產(chǎn)品，用于大量，快速的提取高質量的包涵體。

產(chǎn)品特點：
1.大量提取，1次可處理多達5升的菌液，相當于50次中量提取。
2.適合制備級別的包涵體純化，需在50mL以上的離心管或離心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵體中的細胞壁和細胞膜等非重組蛋白成份，使重組蛋白在包涵體中所占比重達到60%以上。
4. 即可以選擇高壓裂解法，也可以采用酶學裂解法裂解細菌。
5. 得到的包涵體可以用于重折疊，也可以用于凝膠層析和動物免疫。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵體溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵體溶解液可以室溫保存)，有效期一年。

自備試劑：如果得到的重組蛋白確有降解則需要自備蛋白酶抑制劑混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．細胞沉淀：
1．轉移1-5升菌液到干凈的、預稱重量的塑料離心瓶中。如果離心瓶體積不夠大，可以分多次反復離心收集。
2．5000g(相當于Sorvall GSA轉頭5500rpm)4℃離心15-30分鐘，小心棄上清。
3．復稱重量，差值就是細菌的濕重。1升的過夜培養(yǎng)的大腸桿菌濕重一般為3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克細菌。注意：后續(xù)操作的很多溶液都是按此步得到得細胞濕重添加。
4．細胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．細胞裂解(下面兩法中選其一)：
 高壓破碎法(French Press)+超聲法(推薦方法)
1．按每克細菌濕重加入3mL溶液A重懸細胞，可以用玻璃棒攪拌或用Waring搗碎機勻漿(如果細菌濕重超過10克)使細菌懸浮，直到檢測不到成塊的細胞為止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其終濃度為0.2mg/mL。
2．讓細胞通過壓力為16000-18000 lb/in2的高壓細胞破碎儀，收集的細胞裂解液需放冰上。
3．重復上步操作一次或多次，直到大部分細菌都被裂解。注意：每次處理后zuì好在顯微鏡下檢查細菌裂解的比例。
4．將細胞裂解液置于冰浴中，用超聲破碎儀滿功率下超聲處理5分鐘，工作狀態(tài)為50%(開0.5秒，關0.5秒)。此過程中zuì好將細胞裂解液放冰上并用磁力攪拌器攪拌，否則產(chǎn)生的熱量會使包涵體蛋白變性，在純化中丟失。
 酶法+超聲法(在沒有高壓破碎儀器時選方法)
1．按每克細菌濕重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重懸細胞，可以用玻璃棒攪拌細菌沉淀使之懸浮。
2．在細菌懸浮液中加入溶菌酶干粉，使其終濃度為0.2mg/mL，攪拌混勻后37℃放置30分鐘裂解細菌，其間不時需要用玻璃棒混勻。細菌釋放出的DNA將使裂解物變得十分粘稠。如果不粘稠，說明裂解不充分，需要繼續(xù)裂解，否則完整細菌將和包涵體一起沉淀，影響包涵體的純度。由于處理量大，zuì好在顯微鏡下檢查細菌是否充分裂解。
3．將細胞裂解液置于冰浴中，用超聲破碎儀滿功率下超聲處理5分鐘，工作狀態(tài)為50%(開0.5秒，關0.5秒)。此過程中zuì好將細胞裂解液放冰上并用磁力攪拌器攪拌，否則產(chǎn)生的熱量會使包涵體蛋白變性，在純化中丟失。

三．包涵體純化：
1．將超聲處理的細胞裂解液轉移到離心瓶中，22000g 4℃下高速離心60分鐘(注意：轉子不同其對應的離心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重組蛋白，可以保留作為SDS-PAGE對照樣品。
2. 將沉淀(主要由包涵體構成)懸浮在預冷的溶液B中。每克細菌需要5mL溶液B，1升細菌的濕重約3克，大約需要15mL溶液B，用玻璃棒或勻漿器攪拌混勻后室溫放置5分鐘。
3．22000g 4℃下高速離心30分鐘，沉淀將出現(xiàn)三層，zuì下面的是未徹底破裂的細胞碎片，其上是包涵體，zuì上層的松軟沉淀是細胞壁和細胞外膜。如果處理過程中使用過溶菌酶，則此層較薄。小心收集上清，可以作為包涵體次洗滌的對照樣品。
4．重復第8-第9步直到上清變清和zuì上層細胞壁和細胞外膜松軟沉淀消失，此過程一般需要重復洗滌2次(共3次洗滌)，小心收集上清作為包涵體第二次洗滌和第三次洗滌的對照樣品。本試劑盒提供的溶液B足夠一次5升規(guī)模的提取洗3次，如需更多溶液B請單獨購買。
5．上步得到的沉淀即為包涵體，其中重組蛋白一般占60%重量，其余40%為其他蛋白質。此沉淀可以長期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫動物制備抗體，還可以直接進入下面得包涵體的溶解步驟。
6．估計重組蛋白的產(chǎn)率：先需要通過預實驗知道重組蛋白的表達水品，如果表達水平為1%，則1克濕重的細菌中將含有1mg重組蛋白質。此法得到的重組蛋白質的回收率一般在75%，即1mg重組蛋白質能得到0.75mg，丟失0.25mg。

四．包涵體的溶解：
1．在室溫下，將包涵體溶解液加入到包涵體沉淀中，用槍頭充分吹打后漩渦震蕩。如果需要將溶解的包涵體直接用于凝膠過濾層析進一步純化，則按每克原始細胞濕重加入1mL包涵體溶解液，重組蛋白的濃度約為4-5mg/mL；如果需要將溶解的包涵體直接用于蛋白質折疊，則按每克原始細胞濕重加入3mL包涵體溶解液，重組蛋白的濃度約為1-2mg/mL；注意：包涵體溶解液低溫放置會產(chǎn)生沉淀，必須45-65℃溶化并混勻后才能使用。
2．室溫放置1小時使蛋白質充分溶解。
3．100,000g 4℃離心60分鐘(轉速需要根據(jù)離心機轉子的大小換算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：檢查離心管能否承受此離心力。SDS-PAGE檢查是否大部分重組蛋白都在上清中。如果沒有，說明包涵體沒有完全溶解，需要用適當增加包涵體溶解液的用量。
4．將上清(溶解的包涵體)分成10-20mL一份，放于塑料離心管中(不要超過離心管容量的70%)置-80℃長期保存或直接用于復性等試驗。由于不同的蛋白質有不同的zuì佳復性條件，需要用戶自己摸索。包涵體純化過程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析時可能有額外條帶出現(xiàn)。

關注酵母蛋白裂解液，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：

貨號	名稱	規(guī)格
BTN100603	銀染清除劑	30次
YT044	組織線粒體純化試劑盒	50-100次
SNM404	1.5 M×Tris Buffer緩沖液(pH8.8)	500ml
SNM436	WB封閉液(脫脂奶粉)	100ml
SNM502	濃縮型SABC-Cy3免疫熒光試劑盒(適用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一種)	400張片
ALH381	加熱型考馬斯亮蘭快速染色液	500ml|2000ml

如果您覺得“HR0279 酵母蛋白裂解液”描述資料不夠齊全，請聯(lián)系我們獲取詳細資料。(聯(lián)系時請告訴我從給覽網(wǎng)看到的，我們將給您最大優(yōu)惠！)
本頁鏈接：http://www.mingjiewl.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8536235.html
已經(jīng)有953位訪客查看了本頁.