HR8108 包涵體溶解液

產(chǎn)品簡介
包涵體溶解液的品牌是百奧萊博,是優(yōu)質的蛋白質研究產(chǎn)品,本制品用于科研目的,本品質量穩(wěn)定,價位合理,需要包涵體溶解液等蛋白質研究產(chǎn)品的客戶,請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示:包括包涵體溶解液在內,本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:包涵體溶解液
產(chǎn)品貨號:HR8108
產(chǎn)品規(guī)格:50ml|100ml
根據(jù)您的關注的包涵體溶解液,您可能還對以下產(chǎn)品有需求:
名稱:組織培養(yǎng)專用蛋白酶抑制劑
貨號:BTN130531
規(guī)格:1mL
本產(chǎn)品就是混合各種蛋白酶抑制劑而得的200×濃縮液,溶劑為DMSO。組織培養(yǎng)時,各種分泌蛋白會不同程度的被各種外源和內源性蛋白酶降解。為防止分泌蛋白的降解,需要在培養(yǎng)基中添加各種蛋白酶抑制劑。
產(chǎn)品特點:
1. 即開即用,不需要單獨購買每個成分再配制。
2. 抑制譜廣,由多種蛋白酶抑制劑組成,能特異性抑制絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天門冬氨酸蛋白酶及氨基肽酶等各種蛋白酶活性。
3. 它可以與各種組織培養(yǎng)基兼容,在培養(yǎng)基中加入1/200體積即可。
儲存條件:低溫運輸、-20℃保存、有效期兩年。
名稱:一站式SDS-PAGE蛋白電泳套裝
貨號:BTN80810
規(guī)格:30次
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此我們公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
產(chǎn)品特點:
1.一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2.安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到zuì低。
3.靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4.使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5.電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實驗。
產(chǎn)品組成:
| 成分 | 規(guī)格 |
| 丙烯酰胺干粉 | 60g |
| 甲叉雙丙烯酰胺干粉 | 3g |
| 分離膠緩沖液,4× | 200ml |
| 濃縮膠緩沖液,4×(含染料) | 100ml |
| TEMED | 1.5ml |
| 過硫酸銨(干粉) | 1g |
| SDS-PAGE上樣液,5× | 1套(1mL) |
| SDS-PAGE電泳液,1×(干粉) | 1套(20L) |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件:常溫運輸和保存,但TEMED和5×SDS-PAGE上樣液需低溫運輸,分別在4℃和-20℃有效期一年。
自備試劑:去離子水。
使用方法:
1.次使用本產(chǎn)品時需先配制30%丙烯酰胺溶液:在本產(chǎn)品提供的裝有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自備的去離子水,充分搖晃直到溶解即得200mL 30%丙烯酰胺溶液(用手大約搖10-20分鐘)。
2.次使用本產(chǎn)品時還需配制30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液,下同): 不同實驗需要加入不同比例的甲叉雙丙烯酰胺。對SDS-PAGE電泳,丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺比例一般在19:1左右,因為此時PAGE膠的孔徑zuì小,分辨率zuì高。制備方法是將3g甲叉雙丙烯酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙烯酰胺溶液中(注意:甲叉雙丙烯酰胺干粉有神經(jīng)毒性,避免吸入粉末)。配好的30%AB溶液zuì好4℃避光保存并在1月內用完。
3.根據(jù)平板的面積和膠的厚度估計需要配制的濃縮膠和分離膠的體積。并根據(jù)要分離的蛋白質的大小確定選擇濃縮膠和分離膠的濃度,參考下表:
| 蛋白質大小范圍(kD) | zuì佳濃縮膠濃度 | zuì佳分離膠濃度 |
| 15-45 | 4% | 15% |
| 15-60 | 4% | 12.5% |
| 18-75 | 4% | 10% |
| 30-120 | 4% | 7.5% |
| 60-200 | 不需要 | 5% |
注:如果上樣體積少于10μL,可以不需要濃縮膠。
4.配制10%的APS(過硫酸銨):稱0.1克過APS干粉到1mL去離子水中,搖晃溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
5.配制分離膠:在一個25mL的三角瓶中,先按下表的用量加入水、30%AB溶液和4×分離膠緩沖液。以下是配制10mL膠的用量,更大體積則各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神經(jīng)毒性,一定要戴手套操作。
| 膠濃度 | 用量(單位:mL) | ||
| 水 | 30%AB溶液 | 4×分離膠配膠液 | |
| 5% | 5.83 | 1.67 | 2.50 |
| 6% | 5.50 | 2.00 | 2.50 |
| 7% | 5.17 | 2.33 | 2.50 |
| 7.5% | 5.00 | 2.50 | 2.50 |
| 8% | 4.83 | 2.67 | 2.50 |
| 9% | 4.50 | 3.00 | 2.50 |
| 10% | 4.17 | 3.33 | 2.50 |
| 11% | 3.83 | 3.67 | 2.50 |
| 12% | 3.50 | 4.00 | 2.50 |
| 13% | 3.17 | 4.33 | 2.50 |
| 14% | 2.83 | 4.67 | 2.50 |
| 15% | 2.50 | 5.00 | 2.50 |
| 16% | 2.17 | 5.33 | 2.50 |
6.配制濃縮膠(一般使用4%的濃度):在一個25mL的三角瓶中,先按下表的用量加入水、30%A B溶液和4×濃縮膠緩沖液。以下是配制10mL 4%濃縮膠的用量,丙烯酰胺溶液具有神經(jīng)毒性,一定要戴手套操作。
| 膠濃度 | 用量(mL) | ||
| 水 | 30%AB溶液 | 4×濃縮膠緩沖液(含藍色染料) | |
| 4% | 6.17 | 1.33 | 2.50 |
7.將分離膠和濃縮膠溶液搖晃混勻,抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應,不去除將影響丙烯酰胺聚合反應)。
8.分別加入50μL 10%APS和30-50μL TEMED(這是配制10mL分離膠和濃縮膠的用量,更大體積的膠則用量需按比例增加),迅速搖勻。
9.先灌分離膠,在膠的液面距離頂部1.5 cm的時候,停止灌膠。
10.由于分離膠比重較大,可以立即在上面灌濃縮膠,但灌注時必須小心,不要破壞分離膠和濃縮膠的液面,在濃縮膠液面達到頂部時停止灌膠,插入梳子,室溫聚合30-60分鐘。如果不能做到小心灌濃縮膠,則必須待分離膠室溫聚合30-60分鐘后再灌制。
11.拔出梳子,用1×SDS-PAGE電泳液沖洗加樣孔。
12.將凝膠板固定在電泳裝置上,往上槽和下槽加入足夠的1×SDS-PAGE電泳液。本產(chǎn)品提供20升的SDS-PAGE電泳液干粉,將所有干粉溶解在2 L水中即得10×SDS-PAGE電泳液,用時再稀釋成1×工作液。
13.在蛋白質樣品中加入5×SDS-PAGE上樣液(4μL樣品中加1μL上樣液),100℃煮沸3~5分鐘。短暫離心,取上清上樣。
14.先用10 mA的電流電泳(對0.75mm厚×14cm×14cm的膠)直到染料進入從濃縮膠進入分離膠。
15.將電流增加到15 mA,直到染料進入分離膠底部時終止電泳,取出凝膠進行后續(xù)的實驗處理。
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