犬副流感病毒熒光定量RT-PCR是高品質(zhì)的病毒PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要犬副流感病毒熒光定量RT-PCR等病毒PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品的客戶，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括犬副流感病毒熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)?在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：犬副流感病毒熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)?
英文名稱：Canine Parainfluenza Virus qRT-PCR Kit （Probe Method）
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN11-180301
產(chǎn)品規(guī)格：50次

犬副流感病毒（CPIV）可以引起犬副流感，這是犬的主要的呼吸道傳染病。臨床表現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、流涕等癥狀。病理變化以卡他性鼻炎和支氣管炎為特征。研究表明，犬副流感病毒也可引起急性腦髓炎和腦內(nèi)積水，臨床表現(xiàn)后軀麻癖和運(yùn)動(dòng)失調(diào)等癥狀。傳統(tǒng)診斷方法主要有病毒的分離鑒定、免疫熒光抗體試驗(yàn)、免疫電鏡觀察和ELISA 等方法。但這些方法操作過(guò)程繁瑣、操作難度大，所需要時(shí)間較長(zhǎng)，專一性不強(qiáng)因此建立一種快速、高靈敏度的診斷方法對(duì)防治犬副流感病毒是十分必要的。本產(chǎn)品就是針對(duì)這一需求開(kāi)發(fā)的實(shí)時(shí)定量RT-PCR 產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 靈敏度高，分析靈敏度可以達(dá)到50 拷貝/uL，遠(yuǎn)高于常規(guī)方法，也比常規(guī)的RT-PCR 檢測(cè)高100 倍。
2. 特異性高，根據(jù)CPIV的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，不會(huì)誤檢其他豬的病原性病毒
3. 一管封閉式，避免了RT-PCR 產(chǎn)物對(duì)后續(xù)RT-PCR的污染。
4. 線性范圍廣，在10-107 拷貝/uL的靶分子濃度范圍內(nèi)均呈線性。
5. 簡(jiǎn)單快捷，只需要2 小時(shí)即可得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

產(chǎn)品組成：

組分	編號(hào)	規(guī)格(50T)
即用型熒光RT-PCR Mix	BTN101219	750μl
CPIV 專一性引物對(duì)（25uM each）	Yw14141415	100μl
CPIV 陽(yáng)性對(duì)照片段（10E10 拷貝/uL）	Yw14161417	10μl
CPIV 專用探針（5.4nM，5FAM-3HBQ1）	Yw1418	25μl
超純水	BTN100935	1mL

保存條件：-20℃保存，有效期一年。

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規(guī)格：48次/盒

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貨號(hào)：SYA201
規(guī)格：48次/盒

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貨號(hào)：SYA204
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貨號(hào)：SYA228
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貨號(hào)：SYA229
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名稱：東部馬腦炎病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA234
規(guī)格：48次/盒

名稱：西部馬腦炎病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA235
規(guī)格：48次/盒

名稱：新布尼亞病毒單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：SYA249
規(guī)格：48次/盒
一、簡(jiǎn)介：
本試劑盒用一對(duì)新布尼亞病毒特異性引物，結(jié)合特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對(duì)新布尼亞病毒 RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。本試劑盒中新布尼亞病毒的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM。

二、用途：
本試劑盒適用于新布尼亞病毒感染的輔助診斷、監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
新布尼亞熒光qRT-PCR反應(yīng)液 1管 960μL/管
酶混合物 1管 48μL/管
陰性對(duì)照 1管 250μL/管
陽(yáng)性對(duì)照 1管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為12個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。

六、樣品的處理與RNA提取
6.1 樣品前處理
按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-80℃，但不能超過(guò)6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.2g于研磨器中研磨，加入1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL 滅菌離心管中；液體樣品，直接取100μL提取。
6.2 RNA提取
可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR Reaction Buffer、酶混合物，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光SFTSV反應(yīng)液 20μL N×20μL
酶混合物 1μL N×1μL
總量 21μL N×21μL
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入21μL，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照/陽(yáng)性對(duì)照4μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qRT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 42℃ for 20 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 94℃ for 15 sec
55℃ for 30 sec
在55℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
（1） 陰性對(duì)照：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽(yáng)性對(duì)照：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值<35的樣本為陽(yáng)性，表明新布尼亞病毒核酸陽(yáng)性。
（2） Ct值顯示為無(wú)或Ct值≥38的樣本為陰性樣本，表明新布尼亞病毒核酸陰性。
（3） 如果35≤Ct值<38，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽(yáng)性，否則判為陰性。
（4） 對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行新布尼亞病毒 qRT-PCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明新布尼亞病毒核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
（1） 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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