北京百奧萊博供應(yīng)的雙螢光素酶試劑盒用于科研目的，我公司的雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶(hù)訂購(gòu)。...

特別提示：包括雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng)：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：YT273
產(chǎn)品規(guī)格：100次|1000次

本試劑盒是先以螢光素為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)螢光素酶，后以腸腔素為底物來(lái)檢測(cè)海腎螢光素酶，并且在后續(xù)加入海腎螢光素酶底物時(shí)，同時(shí)加入抑制螢火蟲(chóng)熒光素酶催化luciferin發(fā)光的物質(zhì)，使后續(xù)檢測(cè)僅僅檢測(cè)到海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。

試劑盒組分：

報(bào)告基因細(xì)胞裂解液	60ml
螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)試劑	10ml
海腎螢光素酶檢測(cè)緩沖液	10ml
海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×)	100μl

螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物螢光。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的過(guò)程中也會(huì)發(fā)出生物螢光。生物螢光可以通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。本試劑盒的檢測(cè)原理參考下圖。


雙螢光素酶的檢測(cè)原理圖。

通過(guò)螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣
基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動(dòng)子區(qū)克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等，構(gòu)建成報(bào)告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，測(cè)定螢光素酶活性。通過(guò)螢光素酶活性的高低來(lái)判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。Renilla luciferase相對(duì)更多地被用作轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。螢火蟲(chóng)螢光素酶催化luciferin發(fā)光的zuì強(qiáng)發(fā)光波長(zhǎng)為560nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發(fā)光的zuì強(qiáng)發(fā)光波長(zhǎng)為465nm。

注意事項(xiàng)：
1. 加入海腎螢光素酶檢測(cè)工作液后對(duì)于上一步驟中的螢火蟲(chóng)螢光素酶的抑制可以達(dá)到99%以上。但總會(huì)殘留微量活性，因此，宜在轉(zhuǎn)染時(shí)把海腎螢光素酶的表達(dá)量控制在其RLU讀數(shù)高于螢火蟲(chóng)螢光素酶RLU讀數(shù)的10%。海腎螢光素酶的讀數(shù)高于螢火蟲(chóng)螢光素酶的讀數(shù)是完全可以的，通常不會(huì)有明顯的負(fù)面影響。
2. 為取得zuì佳測(cè)定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí)，樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制在相同的時(shí)間內(nèi)，例如30秒內(nèi)；使用具有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí)，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)試劑。
3. 由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
4. 為保證螢光素酶檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，可以采取適當(dāng)分裝后避光保存的方法，以避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)
間暴露于室溫。經(jīng)測(cè)試，反復(fù)凍融三次，對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。
5. 樣品和測(cè)定試劑混合后，必須等待1-2秒，再進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)間通常為10秒，根據(jù)情況也可以測(cè)定更長(zhǎng)或更短時(shí)間，但是同一批樣品宜使用相同的測(cè)定時(shí)間。
6. 海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×) 配制在無(wú)水乙醇中。由于無(wú)水乙醇容易揮發(fā)，有時(shí)會(huì)在初次使用時(shí)發(fā)現(xiàn)體積明顯小于100μl的情況，此時(shí)用無(wú)水乙醇把體積補(bǔ)足至100μl，并混勻后即可使用。
7. 海腎螢光素酶檢測(cè)工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)檢測(cè)效果會(huì)不斷下降，因此不可配制成工作液后長(zhǎng)期保存。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期一年。

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名稱(chēng)：雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：KFS303
規(guī)格：100T
雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒，是先以螢光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)螢光素酶(Firefly luciferase)，后以腸腔素(coelenterazine)為底物來(lái)檢測(cè)海腎螢光素酶(Renilla luciferase)，并且在后續(xù)加入海腎螢光素酶底物時(shí)，同時(shí)加入抑制螢火蟲(chóng)熒光素酶催化luciferin 發(fā)光的物質(zhì)，使后續(xù)檢測(cè)僅僅檢測(cè)到海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種分子量約為61kD 的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin 氧化成oxyluciferin，在luciferin 氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物螢光(bioluminescence)。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD 的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化coelenterazine 氧化成coelenteramide，在coelenterazine 氧化的過(guò)程中也會(huì)發(fā)出生物螢光。生物螢光可以通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。

注意事項(xiàng)
1.無(wú)菌操作。
2.熒光染料操作中注意避光進(jìn)行。
3.由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
4.為保證熒光素酶檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，可以采取適當(dāng)分裝后避光保存的方法，以避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫。
5.螢火蟲(chóng)熒光素酶檢測(cè)試劑、Renilla 熒光素酶檢測(cè)試劑zuì好現(xiàn)用現(xiàn)配。
6.細(xì)胞裂解液及裂解時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞量適當(dāng)增加、延長(zhǎng)。

名稱(chēng)：LXR-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒
貨號(hào)：SY0074
規(guī)格：1μg
LXR熒光素酶報(bào)告基因（報(bào)告基因質(zhì)粒）（LXR luciferase reporter plasimd）是用于檢測(cè)LXRα轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報(bào)告基因。LXRα(liver X receptor α)轉(zhuǎn)錄因子核受體家族的成員之一。LXRα僅在肝臟、腎臟、小腸、肺、腎上腺和巨噬細(xì)胞中表達(dá)。LXRs(liver X receptor)參與機(jī)體多種生理活動(dòng)的調(diào)節(jié)，包括膽固醇的代謝、脂肪的形成、糖原異生和炎癥等過(guò)程。

LXR報(bào)告基因主要用于檢測(cè)細(xì)胞中LXRα的轉(zhuǎn)錄活性、藥物研究以及基因過(guò)表達(dá)和RNAi的表型分析等。

pGMLXRα-Lu是我公司改造后的哺乳動(dòng)物真核表達(dá)載體，在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)LXRα結(jié)合位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測(cè)LXRα的激活水平。同時(shí)，對(duì)載體中預(yù)測(cè)出的其它轉(zhuǎn)錄因子以外的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行了適當(dāng)?shù)耐蛔?，增加了質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合特異性。由于質(zhì)粒體積減小，使得LXR報(bào)告基因質(zhì)粒更易于轉(zhuǎn)染。

質(zhì)粒圖譜



注意事項(xiàng)
本質(zhì)粒未經(jīng)我公司允許不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人實(shí)驗(yàn)室以外的任何人或單位。
為了您的健康，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服和帶一次性手套。

使用說(shuō)明
1.pGMLXRα-Lu可以采用常規(guī)轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞。用熒光素酶檢測(cè)試劑盒或雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
2.LXRα的激活劑，可作為L(zhǎng)XR報(bào)告基因的陽(yáng)性對(duì)照。

儲(chǔ)存條件：-20℃。

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貨號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格
SY0059	NF-κB螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒	1μg
SY0061	STAT3螢火蟲(chóng)熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒	1μg
SY0075	KLF4-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒	1μg
SY0080	HNF4-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒	1μg
SY0098	p53-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒	1μg
SY0124	ELK1-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒	1μg
SY0125	ERRα-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒	1μg

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